РАЗДЕЛ 2
ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Достижение поставленной цели и решение связанных с ней задач мы осуществляли с помощью комплекса экспериментальных исследований, клинических наблюдений и лабораторных методов.
Клиническим наблюдениям предшествовали экспериментальные исследования по изучению иммунотропных свойств плацентарных препаратов "Амниоцен" и "Биоглобин", так как сведения в литературе по данному вопросу весьма ограничены .
Эта часть работы выполнена совместно с сотрудниками лаборатории микробных культур и питательных сред института микробиологии и иммунологии АМН Украины им. И.И. Мечникова (зав. лабораторией - к.б.н. Осолодченко Т.П.).
Клиническая часть работы, касающаяся лечения пародонтита с применением "Амниоцена" и "Биоглобина", проведена на кафедре терапевтической стоматологии Харьковского государственного медицинского университета (зав. кафедрой - профессор Катурова Г.Ф.) и на базе Харьковской областной стоматологической поликлиники ( главный врач Челяпин О. А.)
Храктеристика препаратов, применяемых для исследования иммуномодулирующей активности: "Амниоцен" (Amniocenum)- амниотическая оболочка плаценты человека (ВФС 42-1676-86), производит фирма "Экобинф" г. Сумы. Были использованы дозы: 1,25 мг/кг, 2,5 мг/кг, 5 мг/кг; "Биоглобин" (Bioglobinum)- комплекс биохимических соединений в окисленой форме, полученных из плацентарных тканей человека (ВФС 42-2386-94), выпускает ООО НПФ "Медбиоком, ЛТД" г.Киев. Были использованы дозы: 1,4 мг/кг, 7 мг/кг, 14 мг/кг. "Т-активин"- препарат сравнения, производит фирма "Биомед" г. Москва". Были использованы дозы 0,1 мг/кг.
2.1. Методы экспериментальных исследований
Нами использован комплекс иммунологических методов, позволяющих количественно характеризовать действие испытуемых препаратов на основные звенья иммунитета.
Эксперименты проведены на 438 морских свинках, 2005 беспородных и линейных мышах GBA, С57ВL, (СВАхС57ВL)F1. В качестве контрольных препаратов, обладающих иммунотропными свойствами, использовали "Т-активин", и десенсибилизирующими - димедрол. В части опытов использовали животных со сниженной антиинфекционной резистентностью, что достигалось облучением или предварительной обработкой их циклофосфаном.
С целью исследования роли клеточных элементов в механизмах антиинфекционной защиты в качестве экспериментальной модели использовали метод переноса интактных и активированных in vitro испытуемыми препаратами клеток тимуса, селезенки, лимфатических узлов, перитонеального экссудата, лимфоцитов периферической крови реципиентам со сниженной резистентностью [Powderly].
Исследования проведены в сингенной системе на мышах СВА и F1(CBAxG57BL) массой 16-18 г. Донорами служили интактные мыши, из лимфоидных органов которых готовили взвесь с концентрацией 1x106-1x107 кл/мл и делили ее на 2 порции. Одну порцию обрабатывали одним из испытуемых веществ, инкубировали 1-2 часа при 370С, затем отмывали дважды в 5-кратном объеме среды 199 и вводили внутривенно или внутрибрюшинно реципиентам, предварительно (за 4-24 часа) обработанных циклофосфаном в дозе 200 мг/кг. Контрольные животные получали ту же дозу необработанных препаратами клеток.
Для оценки иммунотропной активности препаратов использовали методы определения антител в сыворотке крови и антителообразующих клеток в селезенке, реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), изучение фагоцитарной активности макрофагов, пролиферации и кооперации Т- и В-лимфоцитов, определение митостатического и лимфотоксического действия, анафилактогенной активности. Все исследования проводили в соответствии с методическими рекомендациями по экспериментальному (фармакологическому) изучению иммуномодулирующего действия фармакологических средств [271].
2.2. Клинические методы обследования больных
Клинические обследования больных начинали с опроса, жалоб больного и тщательного сбора анамнеза. При этом важное значение придавали выяснению особенностей возникновения и длительности заболевания, наследственной предрасположенности, характеру течения, эффекту проводимого ранее лечения. В анамнез включали сведения о перенесенных в прошлом заболеваниях, вредных привычках больного (жевание на одной стороне и др.), профессиональных вредностях, характере питания - регулярность, сбалансированность соотношения в пищевом рационе белков, липидов, углеводов и других веществ. Параллельно с клиническим обследованием выясняли общее состояние организма больного, используя при этом данные консультаций терапевта, невропатолога, эндокринолога, гинеколога.
При объективном осмотре полости рта определяли положение зубов в зубной дуге, наличие трем и диастем, травматических узлов, выраженность бугров и окклюзионное соотношение. Особое внимание обращали на местные раздражающие факторы, усугубляющие течение пародонтита (вид прикуса, глубина преддверия, расположение уздечек, качество пломб и имеющихся протезов, локализацию и консистенцию зубных отложений, подвижность зубов).
Осматривая слизистую оболочку полости рта обращали внимание на ее увлажненность, наличие патологических элементов. При оценке состояния десны определяли ее цвет, консистенцию. Обращали внимание на конфигурацию десневых сосочков, наличие кровоточивости, вид, цвет.
Глубину десневого или пародонтального кармана измеряли с 4-х поверхностей зуба.
О состоянии костной ткани альвеолярной кости и тела челюсти судили по результатам внутриротовой рентгенографии и ортопантомографии.
Клинические исследования дополняли лабораторными исследованиями и клиническими индексами. Так, для определения стойкости капилляров десны и в качестве объективного критерия активности воспалительного процесса и эффективности лечения, основанного на принципе учета времени образования гематомы, использовали метод дозированного вакуума по В.И.Кулаженко [272].
Для оценки наличия воспаления и его локализации в деснах (маргинальная