РАЗДЕЛ 2
Материалы
1,2-пропиленгликоль
чда Merk (Германия)
Тритон Х-100
чда Merk (Германия)
Поливиниловый спирт
чда “Sigma” (M = 70000-100000)
ПЕО-400
чда Merk (Германия)
Твин-80
чда Merk (Германия)
ДМСО
ТУ 6-09-3818-77
ДМФА
Глюкуронидаза
Merk (Германия)
Холестерин
чда
Мочевина
чда
Трипсин
Merk (Германия)
Коразол
Merk (Германия)
Алифатические кислоты
Энантовая, капроновая, капроновая, лауриновая, тридекановая, миристиновая,
пальмитиновая, стеариновая, вокозановая
чда, Merk (Германия)
Алифатические кислоты
Метанол, этанол, пропанол-2, бутанол, пентанол, октанол, додеканол, тридеканол,
тетрадеканол
чда
Катионные ПАВ
децилпиридиний хлорид, тридецилпиридиний хлорид, тетрадецилпиридиний хлорид,
пентадецилпиридиний хлорид, цетилпиридиний хлорид
чда
Многоатомные спирты
пропандиол-1,2, этандиол-1,2, пропандиол-1,3, бутандиол-1,4, глицерин
чда
Приборы
Жидкостный сцинтилляционный фотометр TRІ-CARB 2700 (Canberra PACKARD, США)
Иономер – ЭВ-74
ИК Фурье преобразователь - FTІ-8300 Shіmadzu
Фотоколориметр КФК-2
Весы лабораторые ВЛР-200
В работе были использованы белые беспородные мыши – самцы весом 18-24 г и крысы
– самцы весом 180-200 г (виварий Одесского Медицинского университета).
Методы
2.2.1. Приготовление полимерных матриц,
содержащих производные 1,4-бенздиазепина и усилители проницаемости
Полимерные матрицы изготавливались методом «полив-сушка». Для этого 17%-ный
раствор поливинилового спирта в воде (1,2 г поливинилового спирта и 6 см3
дистиллированной воды) перемешивают с раствором производного 1,4-бенздиазепина
в 1,2-пропиленгликоле (2,6 см3 1,2-пропиленгликоля и 14,4 мг препарата).
Полученный раствор выливают в специальную форму (36 см2) и высушивают до
постоянного веса при относительной влажности 85 % и комнатной температуре,
затем разрезают на матрицы площадью 1 см2. Содержание активного вещества
составляет 0,4 мг/см2.
При приготовлении полимерных матриц, содержащих усилители проницаемости,
предварительно рассчитанные количества усилителя (400 мг) вносят в раствор
поливинилового спирта и перемешивают до гомогенного состояния, нагревая, при
необходимости, до растворения на кипящей водяной бане.
2.2.2 Определение удельной радиоактивности
и радиохроматографической чистоты феназепама
Для определения радиохроматографической чистоты 2-14С-феназепама методом ТСХ
готовят раствор с концентрацией 100 мкг вещества в 1 см3 спирта (0,001%). Для
этого 10,0 мг препарата растворяют в спирте и доводят до объема 100 см3.
Определённые объёмы (0,1-1,0 см3) этого раствора наносят на хроматографическую
пластину “Silufol – 254” и хроматографируют предварительно в четырёххлористом
углероде, к нижнему краю пластины, и в системе: хлороформ: гексан: ацетон
(2:3:2), от старта к верхнему краю пластины. В качестве “метчика” используют
нерадиоактивный феназепам. После хроматографического разделения пластину
разрезают на зоны величиной 0,1 – 0,05 Rf, заливают толуольно - спиртовым
сцинтиллятором (10 см3) и определяют содержание радиоактивности в каждой пробе
на жидкостно-сцинтилляционном фотометре TRI-CARB 2700 (Canberra PACKARD, США).
Удельную радиоактивность препарата (в Ки/моль) определяют по формуле:
где УР(Ки) – удельная радиоактивность (Ки/моль); a – активность образца,
(имп/мин); m – масса внесенного образца, (мкг); M - молярная масса феназепама,
(349,61 мкг/мкмоль), 2,22*106 – активность 1 мкКи.
Удельную активность образца в Бк рассчитывают по формуле:
где УР(Бк) – удельная радиоактивность (Бк/моль); a – активность образца,
(имп/мин); m – масса внесенного образца, (мкг); M – молярная масса феназепама,
(349,61 мкг/мкмоль).
2.2.3 Аппликация ТТС экспериментальным животным
Белым беспородным мышам-самцам массой 18-25 г, на предварительно выбритый
участок спины между лопатками, за определенный промежуток времени до введения
судорожного агента или забора проб апплицируют ТТС размером 1 см2, содержащую
производные 1,4-бенздиазепина, защищая от внешнего воздействия пластиковой
мембраной. Животных помещают в условия свободного доступа к пище и воде и
исключающие груминг.
2.2.4 Определение порога чувствительности к коразолу
Судорожный агент (коразол) вводят животным в виде 1%-ного раствора (в 0,9 %-ном
NaCl) внутривенно (в хвостовую вену) со скоростью 0,01 см3/сек.
Минимально-эффективные дозы коразола, вызывающие клонико-тонические судороги
(ДКТС) и тоническую экстензию (ДТЭ), определяют по формуле:
где D – доза коразола, вызывающая ДКТС (или ДТЭ); V – объем раствора коразола,
см3; m – масса животного, г.
2.2.5 Определение содержания общей радиоактивности в органах
Взвешенные внутренние органы помещают в пробирки, добавляют 1 см3 конц.
муравьиной кислоты (в случае печени – 2 см3) и гидролизуют на кипящей водяной
бане в течение 1 часа. По окончании гидролиза отбирают 0,5 см3 гидролизата,
который переносят во флаконы для жидкостной фотометрии, добавляют 1,0 см3 смеси
толуол : Тритон Х-100 (1:1), заливают 10 см3 толуольно-спиртового сцинтиллятора
и определяют радиоактивность на жидкостном сцинтилляционном фотометре TRI-CARB
2700 (Canberra PACKARD, США). Удельную радиоактивность органов определяют по
формуле:
где УР – удельная радиоактивность органа, (имп/мин/г); a – активность аликвоты,
(имп/мин); mорг. – масса органа, взятого для анализа, (г); Vаликв.-объем
аликвоты, взятой для анализа (см3); VHCOOH-объем муравьиной кислоты, (см3).
Содержание общей радиоактивности в коже определяют по формуле:
где УР – удельная радиоактивность кожи, (имп/мин); a – активность аликвоты,
(имп/мин); mкожи – масса кожи, взятой для анализа, (г); Vаликв.-объем аликвоты,
взятой для анализа (см3); VHCOOH-объем муравь
- Київ+380960830922