ГЛАВА 2
Материалы и методы исследования
Объектом исследования явился водный экстракт из коры осины, полученный на
кафедре фармакогнозии НФаУ под руководством профессора Ковалева В.Н. Субстанция
выделена из коры осины путем экстракции горячей водой с последующим упариванием
и усушкой [17]. Использование в качестве экстрагента горячей воды при получении
фенольного комплекса из коры осины обеспечивает наиболее полную экстракцию
фенольного комплекса в сравнении с таким экстрагентом как спирт (табл.2.1).
Таблица 2.1
Количественный выход экстрактивных веществ
Экстрагент
Вода
30% этанол
50% этанол
70% этанол
количественный выход экстрактивных веществ, %
11,83%
10,22%
8,17%
7,48%
Анализ данных табл. 2.1 свидетельствует, что максимально эффективная экстракция
достигается при использовании в качестве экстрагента воды. Кроме того,
повышение температуры воды до 90-1000С и троекратная замена экстрагента
ускоряет процесс экстрагирования, что позволяет максимально получить БАВ из
сырья при наименьшей затрате времени. В результате получили фенольный комплекс
– водный экстракт из коры осины – порошок светло-коричневого цвета со
специфическим запахом, горьковато-кислий на вкус, хорошо растворимый в воде,
практически нерастворимый в эфире, хлороформе.
Анализ химического состава, подтвердил данные литературы о том, что водный
экстракт из коры осины является суммой салицилатов, флавоноидов, кумаринов,
ароматических кислот, оксикоричных кислот, дубильных веществ, эфирных масел,
углеводов, витаминов что позволило предположить наличие у экстракта
противовоспалительной активности [14, 17-18, 36, 50, 81, 124, 226].
Экспериментальные исследования фармакологической активности и оценку возможного
токсического действия потенциального лекарственного средства выполнены на
четырех видах животных: нелинейные половозрелые белые крысы обоего пола массой
180-230 г, нелинейные половозрелые белые мыши обоего пола массой 18-20 г,
морские свинки массой 350-550г, кроли массой 2400-2700г. Всего в работе
использовано 420 мышей, 460 крыс, 30 морских свинок, 10 кролей. Работа с
животными проводилась в соответствии с Международными требованиями о гуманном
отношении к животным и с выполнением требований директивы 86/609/ЕЕС по
вопросам защиты животных, а также «Методическими рекомендациями по выведению
лабораторных животных из эксперимента» [35, 55, 125].
Согласно Методическим рекомендациям по доклиничекому изучению
противовоспалительных средств [125], действие экстрактов осины изучали на
моделях асептического воспаления, вызванного гистамином (1% раствор),
каррагенином (1% раствор), формалином (2% раствор). Флогогены субплантарно
вводили в заднюю лапу крысы (мыши) в объеме 0,1 мл, в различные сроки измеряли
объем стопы у крыс с помощью механического онкометра; массу лапок мышей
определяли взвешиванием. Изучаемые экстракты осины вводили внутрижелудочно в
виде водных растворов за 1 час до введения флогогена в широком диапазоне
эмпирических доз 15, 20, 25, 50 мг/кг массы животного. В качестве препарата
сравнения был избран вольтарен (диклофенак натрия), как стандартный препарат
сравнения– классический ингибитор ЦОГ, который вводили в его эффективной дозе 8
мг/кг. Интактные животные получали воду [92, 125]
Противовоспалительную активность оценивали в процентах по cтепени угнетения
отека у опытных животных в сравнении с контрольными. Расчеты проводили по
формуле:
А = 100% –
(Моо – Мзо) ґ 100
, где:
Мок – Мзк
А – антиэксудативная активность, %;
Моо – масса отекшей стопы в опыте;
Мзо – масса здоровой стопы в опыте;
Мок – масса отекшей стопы в контроле;
Мзк – масса здоровой стопы в контроле.
Во всех случаях масса стопы выражается в мг [125].
Противовоспалительное действие водного экстракта из коры осины изучали на
модели экспериментальной УФ – эритемы у морских свинок. С этой целью морских
свинок альбиносов фиксировали животом кверху и облучали ультрафиолетовым
светом. Источник – ртутно-кварцевая лампа 400ватт, помещенная на расстоянии 10
см от поверхности кожи, облучение в течение 60 сек. Шерстный покров на животе
предварительно удаляли, кожу закрывали пластинкой, непроницаемой для УФ-лучей,
с четырьмя отверстиями площадью 1см2 каждое. Температура воздуха над
поверхностью кожи не должна превышать 300С (в случае необходимости следует
обдувать кожу вентилятором). Через 5 часов оценивали степень гиперемии каждого
пятна по 4-х бальной системе (максимально возможная степень покраснения у
каждого животного – 16 баллов). Исследуемый экстракт вводили внутрижелудочно за
30 минут до облучения и через 2,5 часа после него. Учитывали степень угнетения
гиперемии кожи у леченных животных в сравнении с контрольными не леченными
животными в процентах [97].
Об анальгезирующей активности исследуемого экстракта судили по способности
изменять болевую чувствительность у крыс. Для изучения механизмов
периферического анальгетического действия водного экстракта из коры осины
использовали модель «уксуснокислых корчей», в основе которых лежит химическое
болевое раздражение. Корчи вызывали внутрибрюшинным введением 0,75% раствора
уксусной кислоты из расчета 0,1 мл на 10 г массы тела животного. Водный
экстракт из коры осины вводили внутрижелудочно за 1 час до индукции корчей. За
животными наблюдали на протяжении 20 мин. Эффективность изучаемой субстанции
оценивали по способности уменьшать количество корчей в исследуемой группе в
сравнении с контрольной и выражали в % [125, 135]. Расчет вели по формуле:
АА =
Ск – Со
ґ 100%
, где:
Со
АА – анальгетическая активность в %;
Ск – среднее количество корчей в контрольной гр
- Київ+380960830922