РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
Матеріалом для дослідження служила олія обліпихово-гвоздикова, яку отримували
шляхом простого змішування (ex tempore) олій обліпихової фармакопейної (ТОВ
“Фітолік”, Україна) і гвоздикової (ТОВ “Ароматика”, Україна) у необхідній для
кожного дослідження концентрації. Обліпихову і гвоздикову олії отримували
відповідно шляхом екстракції зрідженим газом на установці Хладон-12 і
перегрітою парою з наступною фільтрацією на вакуумній установці. Препарати
порівняння – олії обліпихова фармакопейна та 1% соняшниково-гвоздикова.
Дотримані необхідні умови зберігання олій (темний скляний посуд, температура
+5°С). Кількісне визначення каротину і каротиноїдів в обліпиховій олії
проводили фотометрично з використанням стандартного розчину біхромату калію, що
відповідає вмістові 0,00208 мг b-каротину в 1 мл. Вміст суми каротиноїдів у
препараті в перерахунку за b-каротином у мг% (Х) обчислювали за формулою: Х =
Д1 х 10,4/ Д0 х А, де Д1 – оптична щільність досліджуваного розчину; Д0 –
оптична щільність розчину стандартного зразку; А – наважка в грамах. Ця сума
склала 185 мг%. Гвоздикова олія відповідала ТУ У 25399227.001 – 98. Кількість
евгенолу в неї була 80%, ацетевгенолу – 10%.
Вибір методів дослідження проведено у відповідності до методичних рекомендацій
доклінічних досліджень лікарських засобів [106]. Досліди проводили на
статевозрілих тваринах обох статей (273 білих нелінійних мишах масою 18-22 г,
334 білих нелінійних щурах та 180 білих щурах лінії Вістар масою 180-240 г, 30
мурчаках масою 370-430 г, 48 кролях породи Шиншила та 20 нелінійних кролях
масою 2,5-3,0 кг), яких утримували при природному світловому циклі на
стандартній лабораторній дієті з постійним доступом до води відповідно до
рекомендацій В.В. Меньшикова [43], Оболенцевой и соавт. [85]. Робота з
тваринами проводилась згідно з міжнародними вимогами про гуманне ставлення до
тварин та з дотриманням вимог директиви 86/609/ЕЕС з питань захисту тварин.
Групування дослідів наведено у таблиці 2.1.1
Таблиця 2.1.1
Групування дослідів
Назва
експерименту
Вид
тварин
Маса тіла тварини (г)
Кіль-кість тварин (n)
Речовина, що вводиться
Доза (мл/кг; мг/кг)
Шлях вве-дення
Гостра
токсичність
білі миші
20±2
273
обліпихово-гвоздикова олія (1% - 5% - 10% - 20%)
40 мл/кг
50 мл/кг
50 мл/кг
в/шл
п/шк
в/оч
Хронічна
токсичність
білі щури
220±20
30
гіпокловойл
5,4 мл/кг
в/шл
Загальнофармакологічна дія
білі щури
кролі
мурчаки
220±20
2500–3000
400±30
30
20
15
гіпокловойл
5,4 мл/кг
в/шл
Вплив на фагоцитарну активність лейкоцитів
мурчаки
400±30
15
гіпокловойл
обліпихова олія
5,4 мл/кг
5,4 мл/кг
в/шл
в/шл
Протизапальна дія
білі щури
195±15
150
гіпокловойл
обліпихова олія
бутадіон
бутадіон
аспірин
5,4 мл/кг
5,4 мл/кг
20 мг/кг
72 мг/кг
200 мг/кг
в/шл
в/шл
в/шл
в/шл
в/шл
Противиразкова дія
білі щури
230±10
259
гіпокловойл
обліпихова олія
кверцетин
5,4 мл/кг
5,4 мл/кг
250 мг/кг
в/шл
в/шл
в/шл
Гепатотропна дія
кролі
білі щури
2500–3000
220±10
48
75
гіпокловойл
обліпихова олія
1% соняшнико-во-гвоздикова олія
5,4 мл/кг
5,4 мл/кг
5,4 мл/кг
в/шл
в/шл
в/шл
2.1. Токсикологічні методи дослідження
Гостру токсичність обліпихово-гвоздикової олії з визначенням ЛД50 вивчали на
273 білих нелінійних мишах масою 20±2 г за методом Т.М. Алтымышевой и соавт.
(1983). Клас токсичності визначали за загальноприйнятою класифікацією (К.К.
Сидоров, 1973).
Мета дослідження – вибір шляху введення й оптимальної концентрації
обліпихово-гвоздикової олії, вивчення фармакологічної дії рекомендованої форми
БАР в експерименті. Олію вводили у широкому діапазоні емперичних концентрацій
1-5-10 і 20% (відсоток вмісту гвоздикової олії в олії обліпиховій
фармакопейній) одноразово внутрішньошлунково (в/шл), підшкірно (п/шк) або
внутрішньоочеревинно (в/оч) в кількості, припустимій фізіологічними нормами
відповідно 0,8-1,0 і 1,0 мл. Розрахунок дози здійснювали в мл/кг, з урахуванням
вмісту евгенолу, що дозволяло встановити відповідність цієї біологічно активної
речовини до IV або V класу токсичності. Формування груп тварин (по 7 у кожній
групі) проводили в залежності від шляху введення олії та її концентрацій.
Рівень токсичності оцінювали за зміною поведінкових реакцій, нервово-м'язової
збудливості та маси тіла тварин протягом 1-ї доби після введення олії та на
14-й день експерименту (табл. 2.1.2).
Відсутність токсичності характеризувалась наступними критеріями: тварини добре
приймали корм, додавали в масі; були однаково активними, адекватно реагували на
світлові, звукові і больові подразники; патологічних вегетативних ефектів не
спостерігалося; загибелі тварин не було. Прийом корму вважався гарним, якщо
тварини повністю споживали добову норму. При прояві токсичності у тварин, які
вижили, спостерігалося тахіпное, зменшення спонтанної рухової активності,
збільшення частоти серцевих скорочень. Тварини були млявими, погано приймали
корм тільки протягом першої доби після введення олії, деякі були
загальмованими, з вираженою уповільненою реакцією на світлові, звукові і
больові подразники. Кал залишався твердим та сухим.
Таблиця 2.1.2
Критерії оцінки гострої токсичності обліпихово-гвоздикової олії
в експерименті
Клінічні спостереження
Оціночний критерій
Дихання
характер носового дихання, частота, глибина дихання, ціаноз
Рухова активність
швидкість та природа рухів
Судоми
характер спонтанних скорочень м’язів
Офтальмологічні симптоми
сльозоточивість, реакція зіниці на світло, зміщення очного яблука
Серцево-судинні симптоми
ЧСС, серцевий ритм, колір шкіри
Салівація
надмірне виділення слини
Пілоерекція
скуйовдження
Аналгезія
збільшення
- Київ+380960830922