Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Материалом для исследования послужили 90 наблюдений серозных опухолей яичников,
из которых 30 наблюдений составили доброкачественные опухоли, 10 – пограничные
опухоли и 50 – злокачественные. Проведено комплексное клинико-морфологическое
изучение больных серозными опухолями яичников, находившихся на лечении в
клинике Харьковского НИИ медицинской радиологии и в клиниках, обслуживаемых
отделениями патологической анатомии городских клинических больниц № 2 и № 31 с
2000 по 2004 гг.
Во всех случаях разработаны истории болезни, при этом анализу подвергались
следующие данные: возраст больных, жалобы больных, стадия заболевания, характер
лечения, трехлетняя выживаемость больных.
При оценке степени распространения серозного рака яичников в клинике
использовались классификации: по системе TNM (1981) и классификация по стадиям,
принятая Международной федерацией акушеров-гинекологов (FIGO, 1985). При
постановке гистологического диагноза использована Международная гистологическая
классификация опухолей яичников, ВОЗ 1999.
Все больные подвергались оперативному лечению, объем которого зависел от
клинического диагноза и показаний, а именно: экстирпация матки с придатками или
надвлагалищная ампутация матки с придатками, с резекцией 2/3 большого сальника
или без, односторонняя или двусторонняя аднексэктомия, резекция опухолевидно
измененного яичника. Части прооперированных больных с опухолями пограничной
злокачественности и всем больным с серозным раком в послеоперационном периоде
проводилась химиотерапия.
Объектом для морфологического исследования послужили оперативно удаленные
опухоли яичников и их метастазы. Операционный материал подвергали
макроскопическому и микроскопическому (8-10 кусочков) изучению. Парафиновые
срезы толщиной 5 - 8 мкм были окрашены гематоксилин эозином, пикрофуксином по
Ван-Гизон, по Маллори а также были использованы гистохимические методы
исследования – определение дезоксирибонуклеопротеидов по Фельгену –Россенбеку
(ДНП) (контроль – гидролиз с НCI), определение рибонуклеопротеидов (РНП) с
помощью реакции Браше (контроль с кристаллической рибонуклеазой).
Выявлялись также сульфатированные (рН-1,5) и несульфатированные (рН - 3,5)
гликозоамингликаны (ГАГ) окраской толуидиновым синим (Romhangi, 1963),
(контроль - обработка срезов гиалуронидазой). Интенсивность гистохимических
реакций в условных единицах оптической плотности учитывалась на
стереометрических компьютерных изображениях микрофотографий с помощью программы
«Adobe Photoshop 6.0».
Подсчет клеточных элементов стромы изученных опухолей производился на
полутонких срезах толщиной 3-6 мкм, окрашенных гематоксилином/эозином и по
Ван-Гизон с помощью математической программы на цифровом анализаторе
«Olympus».
Иммуногистохимическим методом выявляли экспрессию р53 и Кі-67 в эпителиальных
опухолевых клетках с использованием моноклональных антител фирмы DAKO, клон
DO-7, и MIB-1 соответственно. После удаления первичных антител применялась
система визуализации LSAB2 (биотинилированные антитела и пероксидазный
комплекс), а в качестве хромогена использовали DAB (диаминобензидин). После
иммуногистохимических реакций срезы дополнительно окрашивались гематоксилином
Майера. Антигенные детерминанты к р53 и Ki-67 располагались интрануклеарно,
поэтому позитивными считали только те результаты, в которых были получены
интенсивные ядерные реакции. Экспрессия маркеров оценивалась с учетом
количества окрашенных ядер. Экспрессия Кі-67 оценивалась из расчета количества
ядер прореагировавших клеток на 100 клеток не менее чем в 20 полях зрения на
увеличении 400. При оценке экспрессии р53 реакция считалась негативной при
окрашивании менее 5% ядер и позитивной – при окрашивании более 5% ядер.
Коллагены типировали моноклональными антителами (МКА) к коллагенам I, IV типов
(Novocastra Laboratories Ltd.) Коллаген Ш определяли МКА к коллагену Ш типа
(IMTEK,Ltd). Экспрессию рецепторов к эндотелину-1 определяли МКА к эндотелину-1
(Novocastra Laboratories Ltd.).
Местная иммунная реакция в опухолях яичников оценивалась следующим образом:
определялось общее количество лимфоцитов и макрофагов в поле зрения (х400),
типировались Т-, В-лимфоциты и макрофаги непрямым методом Кунса с
использованием (МКА) LT3, LT4, LT8, LT22, LNK16, фирмы Chemicon (USA).
Дифференцировка макрофагов-киллеров и макрофагов-супрессоров проводилась
согласно "Способу определения мононуклеарных фагоцитов"[126] В качестве
люминесцентной метки использовали F (ab)-2 – фрагменты кроличьих антител против
иммуноглобулинов мыши, меченных ФИТЦ.
Препараты изучали в люминисцентном микроскопе МЛ-2 с использованием
светофильтров: ФС-1-2, СЗС-24, БС-8-2, УФС-6-3. Интенсивность свечения
эндотелина определяли на микрофлюориметре с ФЭУ-35 и выражали в условных
единицах, равных току, протекающему через измерительный прибор, выраженных в
микроамперах (мкА).
Все цифровые данные обработаны методом вариационного и
корреляционно-регрессивного анализов. Графическое представление результатов
измерений выполнено с помощью стандартного пакета прикладных программ Microsoft
Windows на ПК ІВМ.
Глава3. МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВЗАИМООТНОШЕНИЙ СТРОМЫ И ПАРЕНХИМЫ В
СЕРОЗНЫХ ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЯХ ЯИЧНИКА.
Согласно Гистологической классификации опухолей яичников ВОЗ эпителиальные
доброкачественные серозные опухоли представлены следующими формами: а)
цистаденома и папиллярная цистаденома, б) поверхностная папиллома, в)
аденофиброма и цистаденофиброма.
По характеру макро
- Київ+380960830922