РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы исследования
Диссертационная работа выполнена на клинической базе кафедры педиатрии с курсом физиотерапии ФПО (заведующий кафедрой - доктор медицинских наук, профессор Н.Н. Каладзе) Крымского государственного медицинского университета им. С.И. Георгиевского, в санатории "Здравница", г. Евпатория.
Настоящая работа основана на результатах клинических, биохимических, иммунологических, гормональных, функциональных и психологических методов исследования 122 детей с ЮРА; данных катамнестического обследования 41 ребёнка, страдающего ЮРА, которые повторно прибыли на санаторно-курортное лечение спустя 1 год после получения курса санаторно-курортной реабилитации; а также 30 относительно здоровых детей (возраст 7-17 лет) которые отдыхали на Евпаторийском курорте и составили контрольную группу.
Все дети, находившиеся на реабилитации, прибыли из различных регионов Украины - 99 (81,14 %); 23 (18,86 %) ребёнка, проживали на территории Крыма.
Диагноз основного заболевания устанавливался на основании анамнестических данных, выписок из историй болезни и санаторно-курортных карт детей, прибывших на реабилитацию. Диагнозы сопутствующей патологии выставлялись также при тщательном анализе анамнеза и жалоб пациентов, и клинических проявлений в соответствии с "Международной статистической классификацией болезней и проблем, связанных со здоровьем" 10 пересмотра (МКБ-10, Женева, 1995) [90]. Все дети наблюдались в динамике, все исследования проводились при поступлении в санаторий и в конце заезда. Помимо педиатра дети осматривались в обязательном порядке ортопедом, окулистом, эндокринологом, психоневрологом, ЛОР-врачом, стоматологом, гинекологом.
Для оценки состояния пациентов применялись клинические лабораторные методы исследования, общепринятые при обследовании больных ревматологического профиля: общий анализ крови и мочи, биохимический анализ крови с определением уровней общего белка и белковых фракций, С-реактивного белка. Функциональные методы исследования проводились в отделении функциональной диагностики. Для определения состояния сердечно-сосудистой системы всем детям регистрировали ЭКГ. Рентгенологическое обследование было проведено всем детям на этапах реабилитации, предшествовавших курортному и при необходимости повторено в условиях санатория.
Наряду с общепринятыми клиническими, лабораторными и функциональными методами исследования были осуществлены специальные иммунологические, гормональные, функциональные и психологические методы исследования, которые определялись целью и задачами работы.
2.2. Методы исследования
2.2.1. Лабораторные методы исследования
Лабораторное обследование включало общеклинический анализ периферической крови с помощью счётчика Coulter MD с определением следующих количественных параметров:
* лейкоциты, количество в одном литре (ЛейЦ);
* эритроциты, количество в одном литре (ЭриЦ);
* эозинофилы, % (ЭозФ);
* палочкоядерные нейтрофилы, % (ПЯН);
* сегментоядерные нейтрофилы, % (СЯН);
* лимфоциты, % (ЛимЦ);
* моноциты, % (МонЦ);
* гемоглобин, г/л (ГемГ);
* тромбоциты, количество в одном литре (ТроЦ);
* скорость оседания эритроцитов, мм/час (СОЭ).
Биохимические методы обследования включали: определение С-реактивного белка, общего количества белка в крови и белковых фракций. Использовался метод электрофореза в агарозном геле в щелочной среде (pH 8,8) использован набор Гидрогель Протеин, выпускаемый ООО "Кормей-Украина" (Киев).
2.2.2. Методы исследования клеточного и гуморального иммунитета
Изучение иммунологического статуса проводилось при использовании комплекса стандартных и унифицированных тестов.
Клеточное звено иммунитета оценивали методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител и учётом на иммунологическом анализаторе "И-93". Для этого использовали панели моноклональных антител к лейкоцитарным дифференцировочным антигенам серии LT предприятия "Сорбент" (Институт иммунологии РАМН, Москва).
Определяли содержание CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD20+, а также вычисления индекса иммунорегуляции (СD4/СD8).
Для определения концентрации основных сывороточных иммуноглобулинов классов А, М, G использовались тест-системы, предназначенные для количественного определения данных иммуноглобулинов в сыворотке крови методом твердофазного иммуноферментного анализа (производитель - ЗАО "Вектор-Бест" г. Новосибирск), с применением моноклональных антител, обладающих высокой специфичностью к иммуноглобулинам указанных классов.
Циркулирующие иммунные комплексы определяли по методу Haskowa в модификации Ю.А. Гриневич и А.Н. Алферова. Метод основан на селективной преципитации комплексов антиген-антитело в 3,5 % растворе полиэтиленгликоля с последующим фотометрическим определением плотности преципитата.
2.2.3. Методы исследования гормонального статуса
Уровень гормонов в сыворотке крови - трийодтиронина (Т3), тироксина (Т4), тиреотропного гормона (ТТГ) определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью наборов фирмы "БиоРад". Использовались соответственно следующие тест-системы: "ТироидИФА-свободный Т3-01", "ТироидИФА-свободный Т4", "ТироидИФА-ТТГ-1". Концентрация гормонов выражалась в следующих единицах: Т3 , Т4 - нмоль/л, ТТГ - мкМЕ/л.
Уровень кортизола в сыворотке крови определяли также методом твердофазного иммуноферментного анализа. Использовали тест-системы ООО "Хема - Медика" г. Москва и "стероидИФА-Кортизол-01" ЗАО "Алкор Био" г. Санкт-Петербург. Концентрация данного гормона (кортизола) выражалась в нмоль/л.
Определение количественной концентрации АКТГ в плазме крови проводили методом "двухступенчатого" иммуноферментного анализа. Применялись тест-системы, предназначенные для количественного определения концентрации данного гормона в сыворотке или плазме крови (производитель - "Sangui