Глава 2
МЕТОДИКА И методы исследования
Исследования проводилось на базе детской дорожной клинической больницы
г.Харькова.
На I этапе осуществлялось клинико-лабораторное и инструментальное обследование
137 детей в возрасте от 6 до 13 лет. Из них 106 детей больных АБА и 31 здоровый
ребенок.
Клиническое обследование больных проводилось по общепринятой методике: сбор
жалоб, анамнеза (включая тщательно собранный аллергологический анамнез),
объективное исследование по системам и органам.
Всем больным осуществлялись унифицированные стандартные лабораторные
исследования, включавшие клинический анализ крови, мочи, кала; клиническое
исследование мокроты и клеточного состава в отпечатках со слизистой оболочки
носа (риноцитограммы); исследования для исключения муковисцидоза (определение
содержания хлоридов, натрия в поте пилокарпиновым тестом, активности трипсина
кала, диастазы крови и мочи). По показаниям проводили ряд биохимических
исследований крови (электролиты, коагулограмма, гематокрит, кислотно-щелочное
состояние). В комплекс инструментальных исследований входили: рентгенография
органов грудной клетки и придаточных пазух носа, ЭКГ, исследование функции
внешнего дыхания методом спирографии на медицинском диагностическом комплексе
«Сфера-4» и пикфлоуметрии с помощью универсального пикфлоуметра фирмы «Эрих
Егер» (Германия). При анализе спирограмм определяли жизненную емкость легких
(ЖЕЛ), объем форсированного выдоха за 1-ю секунду (ОФВ1), остаточный объем
легких (ООЛ) и общую емкость легких (ОЕЛ) в процентах к должным величинам.
Рассчитывали индекс Тиффно, как процентное отношение объема ОФВ1 и
форсированной ЖЕЛ [136 ]. Результаты спирографии оценивали в соответствии с
рекомендуемыми долженствующими величинами, разработанными О.Ф.Лукиной,
И.С.Ширяевой [135]. При проведении пикфлоуметрии определяли пиковую объемную
скорость форсированного выдоха (ПСВ) в процентах к должным величинам. Измерения
проводились трижды, фиксируя наивысший результат. Результаты пикфлоуметрии
сопоставляли с рекомендуемыми в качестве должных величин [343 ].
Для подтверждения атопической природы заболевания проводилось определение
уровня общего сывороточного IgE с помощью иммуноферментного анализатора с
использованием тест-системы фирмы «Labodia» (Швейцария). Специфи-ческое
аллергологическое обследование методом кожного тестирования с набором бытовых,
пыльцевых, эпидермальных, пищевых аллергенов проводилось всем детям в периоде
клинической ремиссии заболевания с отменой лекарственных препаратов за 24-48
часов до проведения пробы.
На II этапе в соответствии с целью и задачами работы всем больным проводился
специальный комплекс исследований, предусматривающий определение интенсивности
процессов СРОЛ по концентрации МДА в плазме крови и ЭР и показателям БХЛ
сыворотки крови и суточной мочи, содержания ЦН (цАМФ и цГМФ) в плазме крови и
ЭР, уровня кортизола в сыворотке крови, состояния a-адренергической
реактивности бронхов.
Исследования МДА, ЦН в ЭР были предприняты с целью оценки их изменений,
происходящих на уровне клетки. Относительная однородность, отсутствие ядра и
доступность для клинического анализа делают ЭР удобной моделью для изучения
причин дисфункции адренергического механизма при АБА у детей. Исследование
кортизола, как одного из эндогенных антиоксидантов, представлялось
целесообразным в качестве показателя системы антиоксидантной защиты, а также
для суждения о состоянии глюкокортикоидной функции коры надпочечников у больных
АБА, что не менее важно.
Определение конечного продукта СРОЛ – МДА в плазме крови и ЭР проводилось с
помощью тиобарбитуровой кислоты по методу Т.Asakawa [246 ]. Со-держание МДА
рассчитывалось, исходя из величины молярного коэффициента экстинции при 532 нм,
по показателям спектрофотометра (СФ-46).
Для определения интенсивности СРОЛ был также использован биофизический метод
регистрации инициированой 10% раствором перекиси водорода биохемилюминесценции
сыворотки крови и суточной мочи [86]. Измерения проводились на портативном
хемилюминометре с ФЭУ-140 в режиме счета фотонов в биофизической лаборатории
Харьковского физико-технического института АН Украины. При статистическом
анализе БХЛ учитывались три параметра:
1) значение (импульсы в секунду) максимума первой вспышки (Iмакс.) - дает
возможность судить о наличии и количестве продуктов СРОЛ в субстрате (0,2 мл
сыворотки крови или суточной мочи), которые прореагировали с данным количеством
введенного индуцента;
2) значение светосуммы за 4 минуты (У 41) соответствует общему количеству
продуктов СРОЛ, которые прореагировали с индуцентом ;
3) конечное значение (Iкон.) на кинетической кривой БХЛ соответствует
количеству непрореагировавших продуктов СРОЛ, которое тесно связано с резервом
антиоксидантов в субстрате.
Содержание ЦН (цАМФ и цГМФ) в плазме крови и ЭР определяли
радиоиммунологическим методом с помощью стандартных наборов фирмы
«Аmersham»(Англия). Измерение радиоактивности проб проводили на установке для
радиоиммунохимических исследований «Гамма-800». Для суждения об
a-адренергической активности бронхов применяли диагностический тест с
однократным приемом a-адреноблокатора пирроксана в дозе 0,5 мг/кг внутрь с
изучением показателей бронхиальной проходимости (ЖЕЛ, ОФВ1, индекс Тиффно, ПСВ)
до и через 1 – 1,5 часа после приема препарата [92]. Бронходилятационный тест
считали положительным при повышении показателей ОФВ1 и ПСВ более чем на 12%
[105 ].
Определение кортизола в сыворотке крови проводили радиоиммунохимическим методом
с использованием наборов стерон – К-
- Київ+380960830922