РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ
2.1. Місце та умови проведення досліджень
Експериментальна частина роботи виконана на кафедрі мікробіології та вірусології Луганського НАУ, в обласній державній лабораторії ветеринарної медицини м. Луганська, відділі хвороб птахів і відділі патоморфології Інституту експериментальної клінічної ветеринарної медицини м. Харків, у трьох птахогосподарствах Луганської області: ВАТ "Сімейкінське", СТОВ "Авіс", та ТОВ "Агроукрптаха".
2.2. Матеріал і методи досліджень
Обсяг досліджуваного матеріалу:
-клінічно обстежено 2000 голів птиці; патолого-анатомічно розтято 40 трупів курей віком від 110 до 300 діб; 125 голів курчат 15 - 60-добового віку;
-230 задохликів;
-досліджено серологічними та імунологічними методами 1600 проб сироватки крові;
-імунологічними методами досліджено 150 проб стабілізованої крові;
-штами вірусів: епізоотичний штам ЛІ-1 вірусу інфекційного бронхіту курей сокультивований зі штамом 4/91 на КЗ, який знаходиться в музеї НВЦ ЛНАУ (Ігнатов М.М., Петренко Л.Ю., 2001р) ; вакцинний штам вірусу ІБ 4/91 та МА-5.
2.2.1. Епізоотологічний моніторинг птахогосподарств різних напрямків продуктивності
Епізоотичну ситуацію щодо інфекційних хвороб птиці: інфекційний бронхіт курей, аденовірусну та реовірусну інфекцію, мікоплазмоз, колібактеріоз, вивчали на трьох птахофабриках Луганської області: ВАТ "Сімейкінське", СТОВ "Авіс", та ТОВ "Агроукрптаха".
Для визначення епізоотичного стану птахогосподарств проводили аналіз ветеринарно-санітарних та спеціальних заходів щодо охорони від заносу інфекції та захисту від захворювань різної етіології, схем вакцинопрофілактики згідно актів епізоотичних обстежень цих птахогосподарств.
В дослідженнях враховували умови годівлі, утримання птиці, у залежності від напрямків продуктивності, клінічний стан, патологоанатомічні зміни в загиблої та вимушено забитої птиці [173, 191]. Також вели спостереження за інкубаторами, з обліком виводу курчат, та патологоанатомічних змін у "задохликів" та вибракованих курчат [164].
Епізоотологічні дослідження включали визначення джерел збудника, механізму передачі й розвитку патогенних мікроорганізмів в організмі курчат.
Динаміку рівня антитіл у сироватці крові птиці різних вікових груп визначали за даними сероконтролю, який проводили із використанням РНГА, РА та ІФА. Серологічний моніторинг з індикацією збудників вірусних інфекцій дозволяє оцінити найближчу перспективу розвитку епізоотичної ситуації у птахівництві [186, 202].
Бактеріологічні дослідження проводили згідно з "Методичними рекомендаціями з діагностики, профілактики та лікування респiраторного мікоплазмозу (М. gall. - інфекція) та колібактеріозу в промислових птахогосподарствах" [149].
2.2.2. Схеми дослідів
З метою відтворення захворювання на респіраторний мікоплазмоз, та в асоціації з вірусом інфекційного бронхіту курей, в умовах лабораторії, було проведено три експериментальних досліду (табл.2.1, 2.2, 2.3).
Дослідні та контрольні групи курчат, 20-30 добового віку, формували по 5 голів та утримували в окремих приміщеннях. Годівлю здійснювали відповідним до віку птиці комбікормом за нормами інституту птахівництва УААН.
Таблиця 2.1
Схема досліду 1
Групи курчат,
(n=5)Вакци
нована проти:На початку дослід
женняМатеріал, яким інфікувалиМетоди дослідженняМатеріал, яким інфікувалиМетоди дослідженняВік птиці, дібКурчата породи хайсекс-коричневий
з п/г "Сімейкінське"
1.11
29
30
6080110Хвороби МарекаХвороби ІБК
шт. МА-5Сироватку в РНГА на ВІБК та ін.
Кров імунологічноЧистою
культурою
мікоплазми 10-го пасажу розведену за стандартом мутності в об'ємі 220 млн/мл
і/н та і/о у дозі
0,25 мл/голСироватку
в РНГА на наявність АТ до ВІБК.
Кров - імунологічно Вели спостереження за клінічним станом.ВІБК
4/91-ЛІ-1
і/н
у дозі
0,3 мл/голРНГА - АТ до ВІБК
ІФА - АТ до ВІБК
та M.G
Імунологічні
Клінічні
Патологоанатомічні
ПЛР - на наявність мікоплазми в організмі1.2Контрольна група
Сироватку
в РНГА
на наявність
АТ до ВІБК.
Кров - імунологічно Контрольна група
РНГА - АТ до інфекційних чинників.
ІФА
Імунологічні Примітка: і/н - інтраназально, і/о - інтраокулярно
Таблиця 2.2
Схема досліду 2
№ групи, (n=5)На початку дослідженняМатеріал,
яким інфікували
Методи
дослідженняКурчат отримали з інкубаційного яйця від домашньої неімунізованної птиці
2.1Вік птиці, діб253050Досліджували сироватку в РНГА на наявність материнських АТ до ВІБК та інших вірусних інфекцій.
Кров імунологічно.
Бульонною культурою
мікоплазми
11-го пасажу, розведеної за стандартом мутності
в об'ємі 220 млн/мл,
і/н та і/о у дозі 0,25 мл/гол Клінічно Патологоанатомічно
Гістологічно
Імунологічно
ІФА
РНГА
ПЛР
Бактеріологічно
2.2Вакцинним вірусом
ІБК штаму МА-5
і/н у дозі
0,25 мл/голКлінічно
Патологоанатомічно
Гістологічно
Імунологічно
ІФА
РНГА
ПЛР
2.3Одночасно
вводили бульйонну
культуру мікоплазми
11-го пасажу
та вакцинний вірус
ІБК шт. МА-5
і/н та і/о, в об'ємі
220 млн/мл
у дозі по 0,25 мл/голКлінічно
Патологоанатомічно
Гістологічно
Імунологічно
ІФА
РНГА
ПЛР
Бактеріологічно
2.4Контрольна група вводили фізіологічний розчинГістологічно
Імунологічно
РНГА
ІФА
Таблиця 2.3
Схема досліду 3
№ групи, (n=5)На початку дослідженняМатеріал,
яким інфікувалиМетоди дослідженняВік птиці, діб15203050Курчат отримали з приватного інкубатору від батьківського стада п/г "Сімейкінське"3.1Досліджували сироватку в РНГА на наявність материнських АТ до ВІБК та інших вірусних інфекцій. Кров досліджували імунологічно.Контрольна група.
вводили фізіологічний розчинІмунологічно
РНГА -до ВІБ3.2Вакцинним штамом 4/91 ВІБ і/н
у дозі 0,25 мл/гол-Клінічно
Пат-анатом
Імунологічно
РНГА3.3 Вакцинним штамом МА-5 ВІБ і