РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
2.1. Модель іммобілізаційного стресу. Структура і об'єм досліджень
В даний час увага дослідників прикована до вивчення метаболічних систем організму, що беруть участь у формуванні стрес-реакції, проте фізіологічні адаптивні ефекти стресу можуть перетворюватися на ушкоджувальні і призводити до порушення структури і функції органів і систем [124]. Для оцінки ступеня метаболічних порушень доцільне комплексне дослідження показників протеїназ-інгібіторної (трипсиноподібної, еластазоподібної активності, рівня кислотостабільних інгібіторів і антитриптичної активності) і окислювально-антиоксидантної (супероксиддисмутази, ТБК-активних продуктів, каталазоподібної, пероксидазоподібної активності, церулоплазміну) систем. Вибір досліджуваних показників обумовлений як складністю і багатофакторністю патогенезу виникаючих порушень, так і необхідністю отримання поглиблених знань про патогенез метаболічних порушень і пов'язаних з ними змін в тканинах органів при моделюванні іммобілізаційного стресу.
Інтерес представляє також виявлення взаємозв'язку змін в протеїназ-інгібіторній та окислювально-антиоксидантній системах зі станом церебральної гемодинаміки. Оскільки регуляція кровопостачання мозку основана на складній взаємодії комплексу фізіологічних механізмів, включаючи міогенний, нейрогенний і метаболічний, які забезпечують її адаптацію до дії збуджуючих стимулів, то дослідження тільки змін швидкості кровотоку (КТ) не завжди повною мірою дає уявлення про компенсаторні можливості цереброваскулярної системи. Під впливом стресора регуляторна активність судин мозку може істотно змінюватися, внаслідок чого в екстремальних умовах, що супроводжуються напругою компенсаторних механізмів, можлива зміна або навіть спотворення їх відповідей на збуджуючі стимули екзогенної і ендогенної природи. Таким чином, існує необхідність комплексного вивчення мозкового кровообігу у взаємозв'язку зі станом його регуляції, проникності мембран і тканинного обміну.
У зв'язку з вищеописаними відомостями загальний алгоритм експериментів полягає в наступному. В гострих і хронічних експериментах при моделюванні ІС і комбінації його з турнікетним шоком досліджувати параметри протеїназ-інгібіторної та окислювально-антиоксидантної систем. Разом з вищезгаданими методами дослідження, застосувати вивчення локального мозкового кровотоку, реактивності судин, напруги кисню в корі великого мозку і підкіркових структурах, водно-електролітного балансу мозкової тканини, кислотно-лужного стану, провести аналіз патоморфологічних змін в міокарді, легенів, шлунку, печінці за допомогою електронної мікроскопії. В серіях експериментів з вираженими порушеннями біохімічних показників провести оцінку ефективності введення інгібітору протеїназ контрикалу, антиоксиданту корвітину та їх комбінації при ІС. На підставі одержаних даних запропонувати використовування найбільш оптимального варіанту лікарських засобів, ефективність якого піддати глибшому дослідженню.
Стрес характеризується полісиндромністю і різноманіттям форм, що обумовлено в значній мірі великою кількістю умов для його виникнення, і, відповідно, відмінністю характеристик діючих стресових чинників [42, 120, 125, 138, 146]. Тому ми визнали коректнішим проводити дослідження в умовах моделювання стресової ситуації на тваринах, що, крім стабілізації параметрів стресування, дозволяє розширити коло методик, що використовуються.
Експериментальні дослідження проведені на 154 білих щурах-самцях лінії "Vistar", масою 180-200 грамів, на 30 кролях, масою 2500-3000 грамів - по вивченню біохімічних показників сироватки крові і на 15 кролях з імплантованими в кору, таламус і гіпоталамус платиновими електродами - по вивченню параметрів мозкового кровотоку.
Як об'єкт для вивчення метаболічних порушень вибрали щурів і кролів, оскільки ці тварини легко піддаються стресуванню і зручні для експериментальних досліджень. Так, у кролів можлива імплантація електродів в мозок і проведення хронічних експериментів. Кролі з імплантованими електродами зручні для тривалого утримання в умовах віварію впродовж хронічних дослідів, і не проявляють агресивності в безсонному стані.
Утримання тварин у віварії було однаковим, що є необхідною умовою створення структурної групи [169]. Температура приміщення, де здійснювалися експерименти, складала 19-22°С. Експериментальні дослідження проводилися відповідно до вимог "Європейської конвенції про захист хребетних тварин, які використовуються в дослідницьких та інших наукових цілях" (Strasburg, 18.03.1986) [27]. Експерименти проводилися згідно дозволу Вченої Ради Кримського медичного інституту (протокол №103 від 30.11.77).
Аналіз літератури свідчить про те, що найадекватнішим методом моделювання метаболічних порушень, що виникають при стресі, як про це свідчать літературні дані, є іммобілізаційний стрес [57]. Тому ми застосовували цей спосіб для вивчення метаболічних порушень при ІС методами біохімічного, електрофізіологічного і морфологічного аналізу.
Модель іммобілізаційного стресу. Як модель метаболічних порушень при стресі нами застосовувалася іммобілізація експериментальних тварин: щурів і кролів в тісних клітках-пеналах в положенні на животі. Вибір моделі іммобілізаційного стресу обумовлений хорошою відтворністю, частотою зустрічаємості цього виду стресу в реальних умовах, достатньою силою досліджуваної стресової дії, зручністю здійснення експерименту, можливістю вивчення гострого і хронічного стресу. Використовували гострий іммобілізаційний стрес протягом 6-ти годин [89], іммобілізаційний стрес протягом 12-ти годин [78]. Хронічний іммобілізаційний стрес відтворювали шляхом поміщення тварин в клітки-пенали по 6 годин щодня протягом 5-ти днів. Вибір тривалості стресової дії узгоджується з літературними даними, які свідчать про стадійність стресової реакції і відповідає періодам максимальної виразності специфічних проявів іммобілізаційного стресу [6, 57, 121]. Таким чином, тривалість дії ІС
- Київ+380960830922