РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Методы исследования
Работа выполнена в 2004-2006 годах на кафедре терапии и клинической фармакологии Харьковской медицинской академии последипломного образования в гастроэнтерологическом отделении Областной студенческой больницы г. Харькова, являющейся клинической базой кафедры (зав. каферой - д.мед.н., профессор А.Г. Опарин). При постановке диагноза учитывали данные клинических методов исследования, результаты лабораторных и инструментальных методов исследования: клинический анализ крови, мочи, копрограмму, биохимическое исследование крови, включающее определение билирубина, АЛТ, АСТ, щелочной фосфатазы, ультразвуковое исследование (УЗИ) внутренних органов, рентгеноскопию желудочно-кишечного тракта, фиброгастродуоденоскопию (ФГДС), интрагастральную рН-метрию, электрокардиограмму (ЭКГ), эхокардиограмму (ЭхоКГ). В работе использована классификационная схема ЯБДПК П.Я. Григорьева (1997) и международный классификатор - МКБ-Х.
ФГДС проводилась с помощью аппарата ХР-20 фирмы "ОLYMPUS" по стандартной методике. После проведения местной поверхностной анестезии 2% раствором лидокаина через ротовую полость вводили зонд эндоскопа, оценивая проходимость пищевода, состояние СО, кардиального сфинктера. При дальнейшем продвижении зонда в желудок оценивали наличие и характер содержимого натощак, состояние рельефа складок СО, характер перистальтических волн, наличие изменений СО, состояние привратника. В ДПК оценивали состояние СО луковицы и залуковичной области. При наличии язвы оценивали ее размеры. Для проведения гистохимических исследований, изучения стромального компонента, а также для обнаружения хеликобактерной контаминации СО производилась биопсия из слизистой гастродуоденальной зоны.
Полученные методом щипка 2-3 биоптата СО из краев язвы и антрального отдела желудка фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, обезвоживали в спиртах, заливали в парафин, после чего изготавливали серийные срезы толщиной 4-5х10-6м. Патоморфологическое исследование осуществляли комплексом гистологических и гистохимических методик, адекватных цели исследования. Обзорные препараты, окрашенные гематоксилином и эозином, использовали для общей оценки состояния исследуемых тканей. Окрашивание препаратов фукселеном на эластические волокна по Вейгерту с докрашиванием пикрофусином по методу ван Гизон использовали для выявления и дифференцировки соединительнотканных структур. Для более углубленного изучения соединительнотканных структур использовали окраску по Маллори для выявления коллагеновых и ретикулярных волокон. Дезоксирибонуклеопротеиды (РНП) выявляли окраской по методу Фельгена-Россенбека (контроль - гидролиз с HCl). Для оценки состояния стромального комплекса в гастробиоптатах и оценки слизистого барьера изучали комплекс гликозаминогликанов. Окраской альциановым синим по Хейлу определяли содержание кислых гликозаминогликанов (ГАГ). С помощью ШИК-реакции по Мак Манусу Хочкису (контроль с амилазой) выявляли нейтральные мукополисахариды (НМПС). Результаты оценивали цитофотометрично с использованием компьютерных технологий.
Гистологические и гистохимические методики выполняли по прописям, изложенным в руководствах по гистологической технике и гистохимии [64, 65,78,97].
Гистологический диагноз устанавливали на основании принятой классификации [7].
Изучение микропрепаратов проводили на микроскопе "OLYMPUS BX-41" с последующим микрофотографированием.
Для идентификации и количественной оценки Н. pylori был применен гистологический метод исследования путем усиленной окраски гистологических препаратов биоптатов СО желудка по Романовскому-Гимзе [6].
При этой окраске Н. pylori окрашиваются в темно-синий цвет и хорошо определяются как на поверхности покровного эпителия (чаще в слизи), так и в глубине ямок, в просвете желез, а также в интерцеллюлярных промежутках, при этом Н. pylori чаще всего представлен палочковидными и V-образными формами ("типа чайки"). В полученных гистологических препаратах выделяли три степени контаминации Н. pylori СО желудка [6], обозначаемые количеством плюсов (+) при увеличении микроскопа Х630:
* слабая (+) до 20 микроорганизмов в поле зрения;
* средняя (++) до 50 микроорганизмов в поле зрения;
* высокая (+++) более 50 микроорганизмов в поле зрения.
Биохимическое исследование гастробиоптатов для верификации Н. pylori проводили с помощью посева на среду Закса (спиртовой раствор мочевины и индикатора) с использованием методики D. Grechem, 1987. Результат реакции оценивали через 30 минут изначально и через 20 часов окончательно. Изменение окраски среды с желтого на фиолетовый цвет указывало на присутствие Н. pylori, обладающих уреазной активностью [27].
Приготовление и окраска гистологических препаратов проводилась на базе кафедры патологической анатомии Харьковского государственного медицинского университета.
Рентгенологическое исследование ЖКТ с контрастированием взвесью сульфата бария проводилось при наличии противопоказаний к проведению ФГДС на рентгенодиагностическом комплексе EDR-750-B по стандартной методике. С помощью этого метода оценивалась проходимость пищевода, его контуры, а также, тонус, размеры и контуры желудка, его перистальтическая активность, состояние СО желудка и ДПК при дозированной компрессии. При наличии язвенного дефекта оценивались его размеры.
Для оценки желудочной секреции использовали способ внутрижелудочной (интрагастральной) рН-метрии с применением специальных двухоливных рН-зондов с сурьмяно-каломелевыми электродами (антральным и корпусным) на аппарате ИКЖ-2 по стандартной методике. Показатели рН для корпуса и антрума желудка регистрировались каждые 5 минут. Первые 45 минут исследовали рН базального периода желудочной секреции.
Показатели оценивались по следующим параметрам:
* в корпусе желудка: гиперацидность - рН 1,5; нормацидность - рН = 1,5-2,0; гипоацидность - рН 2,0 (до 3,0); глубокая гипоацидность - рН 3,0 (до 6,0); анациднос
- Київ+380960830922