ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Работа выполнялась в течение 2002-2005 гг. в Донецком региональном центре
охраны материнства и детства (ДРЦОМД – генеральный директор, член-корреспондент
АМН Украины, д.мед.н., профессор Чайка В.К.), на базе отделения акушерской
реанимации, I и II родильных отделений, гинекологического отделения № 2, центра
акушерской гемокоррекции. Лабораторные исследования проводились в
научно-исследовательской лаборатории кафедры эпидемиологии Донецкого
государственного медицинского университета (ДонГМУ) им. М. Горького и в
научно-исследовательских лабораториях НИИ медицинских проблем семьи и Донецкого
регионального центра охраны материнства и детства.
Исследование было организовано согласно заранее разработанной программе и
включало 5 этапов (рис. 2.1).
На первом этапе была изучена научная литература и проведен ретроспективный
анализ 126 историй родов пациенток с ГВЗ в пуэрперии для уточнения наиболее
значимых факторов риска развития гнойно-воспалительных осложнений послеродового
периода.
Второй этап выполнения работы мы изучили динамику изменения уровней
интерлейкинов у родильниц с осложненным и нормальным течением послеродового
периода. Интерлейкиновый статус изучали перед родами, на второй, третий, пятый
день у пациенток, входящих в группу риска по реализации послеродовых инфекций
(группа А – 108 человек) и у пациенток с нормальным течением послеродового
периода (группа В – 30 человек).
Родильницы, которые входили в группу А, в дальнейшем разделились на две
подгруппы:
Рис. 2.1. Этапы программы исследования
С – родильницы, у которых не развились ГВЗ (56 человек).
Д – родильницы, с развившимся ГВЗ в послеродовом периоде (52 человека).
На этом этапе исследования были определены уровни интерлейкинов, которые
являются достоверно значимыми в доклинической диагностике послеродовых
гнойно-воспалительных заболеваний.
На третьем этапе включал изучение влияния различных доз рентгеновского
облучения на показатели иммунокомпетентных клеток (in vitro). Был осуществлен
подбор и определение оптимального режима дозирования облучения через оценку
количественного содержания Т-лимфоцитов и сохранность рецепторного аппарата.
Также на этом этапе изучалось влияние различных доз облучения на уровень
провоспалительных и противовоспалительных цитокинов.
При проведении экспериментального изучения влияния различных доз ионизирующего
облучения на кровь in vitro была обследована кровь 3-х групп иформированных
штатных доноров Донецкой областной станции переливания крови.
I группа – кровь 10 доноров подвергалась облучению 70 Гр.
II группа – кровь 10 доноров подвергалась облучению 120 Гр.
III группа – кровь 10 доноров подвергалась облучению 300 Гр.
При изучении влияния различных доз облучения на кровь in vitro проводился забор
крови из кубитальной вены у доноров в количестве 20 мл. Затем контейнер с
кровью устанавливался в трубке терапевтического аппарата без фильтра РУМ-17.
Доза облучения контейнеров с кровью была различной: 300 Гр., 120 Гр., 70 Гр.
После облучения с целью оценки повреждающего действия различных доз
ионизирующего излучения изучали качественный и количественный состав
Т-лимфоцитов, состояние фагоцитоза, изменение содержания интерлейкинов ТNFб,
IL 1, IL 2, IL 6, IL 8.
Методика трансфузии РОВОАК пациенткам заключалась в заборе крови у родильниц в
ампулу с консервантом в объеме 200 мл и облучении ее в терапевтическом
рентгенологическом аппарате РУМ-17 в течение 10 мин., доза облучения составила
120 Гр. с последующей реинфузией аутокрови пациентке.
Клинико-лабораторные и инструментальные методы включали:
Общеклиническое обследование: общий анализ крови, анализ мочи, выделений;
биохимический анализ крови: общий белок, креатинин, билирубин, АЛТ, АСТ;
развернутая коагулограмма; бактериологический посев содержимого влагалища.
Состояние иммунных реакций оценивали выявлением цитокинов: IL 1, 6, 8 и ФНОб
при помощи оборудования производства ООО «Протеиновый контур» (С-Петербург),
посредством твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) с применением
пероксидазы хрома в качестве индикаторного фермента. Уровень IL 2 определяли
при помощи люминесцентного микроскопирования после специфического связывания
соответствующими моноклональными антителами (МКА) CD25+, производства
Московского научно-производственного центра «Медбиоспектр» и окрашивания
антиглобулиновыми антителами, мечеными флюорохромом.
Состояние клеточного иммунитета оценивали определением популяционного и
субпопуляционного состава Т клеток (CD3+, CD4+, CD8+) и NK-клеток (CD16+) с
помощью соответсвующей тест-системы NCA (моноклональными антителами).
Функциональную способность Т-звена иммунитета исследовали путем оценки
состояния рецепторного аппарата иммунокоррегирующих клеток в реакции
спонтанного и активного розеткообразования с эритроцитами барана, а затем – в
нагрузочных тестах с теофиллином и левамизолом.
Тест спонтанного розеткообразования для определения содержания популяции зрелых
Т-лимфоцитов выполняли по Tondal et al. Мазки окрашивали по Романовскому-Гимзе.
Розеткообразующие антитела лимфоцит, присоединивший три и более эритроцита.
Содержание розеткообразующих лимфоцитов выражали в относительных единицах.
Активное розеткообразование определяли по стандартизированному методу Б.В.
Пинегина и соавт.. Последовательность дальнейшей обработки материала
соответствовала методу Jondal et al.. Чувствительность Т-лимфоцитов к
теофиллину определяли путем постановки реакции розеткообразования после
предварительной 60-м