РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
2.1. Препарати і реактиви, використані в роботі
В експериментах використовували нові БАР на основі
оксіетилідендифосфонатогерманатів з біолігандами – нікотиновою кислотою,
нікотинамідом і магнієм (відповідно МІГУ- 4, 5, 6), які були створені на
кафедрі загальної хімії та біополімерів ОНУ ім. І.І. Мечнікова під керівництвом
з.д.н.т. України, професора І.Й. Сейфуліной. [24, 25]. При дослідженні
загальної нейротропної активності цих сполук використовували дози, що
становлять 1/10, 1/20, 1/40 і 1/80 ЛД50, які наведені в табл. 2.1.
Таблиця 2.1
Дози координаційних сполук германію, використані в роботі
Сполуки
Дози (мг/кг)
1/10 ЛД50
1/20 ЛД50
1/40 ЛД50
1/80 ЛД50
МІГУ-4
34,0
17,0
8,5
4,2
МІГУ-5
56,0
28,0
14,0
7,0
МІГУ-6
45,0
23,0
12,0
6,0
БАР розчиняли у фізіологічному розчині NaCl і вводили тваринам
внутрішньоочеревинно (в/о) за 30 хв до початку дослідження. Тваринам
контрольних груп вводили аналогічний об'єм фізіологічного розчину.
Використовували такі препарати і реактиви: тіопентал натрію (50,0 мг/кг,
«Київ-медпрепарати»), гексенал (20,0 мг/кг, «Київ-медпрепарати»), діазепам (5
мг/кг, «Київ-медпрепарати»), фенамін (1 мг/кг, «Київ-медпрепарати»),
карбамазепін (10,0-80,0 мг/кг, «АСТА-медика», Німеччина), вальпроєва кислота
(40,0-300,0 мг/кг, «АСТА-медика», Німеччина), фенітоїн (25,0 -100,0 мг/кг,
«АСТА-медика», Германия), топірамат (138,0-377,0 мг/кг, «Sigma», Німеччина),
габапентин (107,0-234,0 мг/кг, «Sigma», Німеччина), ламотриджин (23,0-153,0
мг/кг, «Sigma», Німеччина), левітирацетам (5,0-10,0 мг/кг, «Sigma», Німеччина),
оксотреморин (0,25 мг/кг, «Sigma», Німеччина), бікукулін (2,5 мг/кг, «Sigma»,
Німеччина), пентилентетразол (85 мг/кг, «Sigma», Німеччина), пікротоксин (2,7
мг/кг, «Sigma», Німеччина), стрихнін (1,2 мг/кг), скополаміну гідробромід (0,5,
5,0, 10,0 мг/кг, «Sigma», Німеччина), скополаміну метилбромід (0,005, 0,05, 0,5
мг/кг «Sigma», Німеччина), L-DOPA (8,0, 16,0 мг/кг Sigma, Німеччина), резерпін
(2 мг/кг, Рауседил, Гедеон Рихтер, Угорщина), N-метил-D-аспартату (0,2 нг/5 мкл
і 3,0 нг/5 мкл, «Sigma», Німеччина), каїнова кислота (30 і 100 нг, «Sigma»,
Німеччина), 6-гідроксидофаміну (6-ГДА), флупертин (5,0, 10,0 мг/кг, «Sigma»,
Німеччина), кромакалін (100,0 - 400, 0 мкмоль).
2.2. Підготовка тварин до експерименту
Досліди проводилися на щурах – самцях лінії Вістар масою 140 – 250 мг і білих
мишах-самцях лінії СВА, масою 18 – 26 г. Тварини утримувалися на стандартній
лабораторній дієті при природному світловому циклі. З метою виключення впливу
циркадних ритмів на ефекти препаратів усі експериментальні досліди проводилися
в один і той самий час доби.
Операційна підготовка тварин включала імплантацію канюль у структури мозку.
Провідні канюлі виготовлялися з ін'єкційних голок зовнішнім діаметром 0,6 мм і
мали стандартну довжину 10 мм. Для наркотизації тваринам в/о вводили етамінал
натрію (Ceva, Франція) у дозі 35,0 мг/кг. Щурів фіксували в стереотаксичному
апараті Ковача (Угорщина), робили розріз м'яких тканин голови і за допомогою
бормашини свердлили трепанаційні отвори в кістках черепа. Після введення канюль
їх фіксували до кісток черепа зубним цементом і швидкотверднучою зубною
пластмасою. Канюлі імплантували по координатах стереотоксичного атласу G.
Paxinos and C. Watson [174] в одну з таких структур: унілатерально в бічний
шлуночок ( АР = - 0,5; L = 1,5; Н = 3,5) або білатерально у хвостате ядро (АР =
- 1,8; L = 4,5; Н = 4,5).
2.3. Вивчення впливу нових БАР на поведінкові реакції інтактних тварин
Для вивчення впливу нових БАР на поведінкові реакції інтактних тварин
використовувалися такі моделі: актометрія, «відкрите поле», обертовий стрижень,
умовна реакція активного уникнення, а також аналізувалися фармакологічні ефекти
сумісного введення нових БАР зі стандартним депримуючими і збудливими
засобами.
2.3.1. Вивчення впливу БАР на рухову активність
Дослідження впливу БАР на загальну рухову активність здійснювали методом прямої
актометрії. Актометр являв собою закритий бокс розміром 45х45х45 см із
затемненим оглядовим склом, що має рухливу підлогу – платформу із закріпленим
під ним сейсмодатчиком, коливання якого реєструвалися через підсилювач
біопотенціалів ПБП 2/03 за допомогою програмного реверсного лічильника Ф 5264 і
виводилися на друкувальний пристрій «Орteka» за допомогою транскриптора Ф 5255.
Рухова активність реєструвалася кожні 15 хв протягом однієї години після
введення БАР, а потім визначалися середні показники.
Модель «відкритого поля» [175, 176, 177] дозволяє досліджувати горизонтальну,
вертикальну рухову активність, а також дослідницьку (число заглядань у «нори»),
та емоційні реакції (число болюсів, грумінг). Перед початком дослідження щура
поміщали в скляний конус і через 30 с повільно зсаджували в центр відкритого
поля і спостерігали протягом 2 хв. Фіксувалося число пересічених квадратів,
вертикальних стійок, заглядань в отвори, а також число болюсів і грумінгів
(умивань морди передніми лапами).
Вивчення впливу БАР на координацію рухів мишей здійснювали за допомогою тесту
"обертового стрижня" [178]. Останній являв собою стрижень діаметром 3 см зі
швидкістю обертання 6 оборотів на хвилину. Одночасно на стрижні знаходилось 8
мишей, відділених одна від одної перегородками. В експериментальну і контрольну
групу відбиралися тварини, здатні утриматися на ньому протягом 2-х хв.
Враховували число тварин, не здатних утриматися протягом 2-х хв на обертовому
стрижні.
2.3.2. Вивчення впливу БАР на реакцію активного уникнення
Активне уникнення досліджували у звуко- і світлоізольова
- Київ+380960830922