РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
З огляду на потребу сучасної проктології в розширенні номенклатури засобів для
лікування ГМ, зокрема топічних лікарських засобів, співробітниками ВАТ “ХФЗ
“Червона зірка” була розроблена принципово нова комбінована мазь
багатоспрямованої дії на основі загальновідомих лікарських речовин. Діючими
компонентами мазі є екстракт насіння каштана кінського, екстракт кори дуба та
лідокаїну гідрохлорид. Мазь отримала назву “Естан”.
Об’єктом наших досліджень була нова комбінована мазь “Естан” для ректального та
зовнішнього застосування.
Усі дослідження були проведені на 212-и безпородних білих мишах, 366-и
безпородних білих щурах, 12-и мурчаках та 35-и кролях. Характеристика тварин
представлена нижче при описі експериментальних моделей. Щури, мурчаки та кролі
були вирощені у віварії ЦНДЛ НФаУ (м. Харків) і перед початком експерименту
проходили акліматизацію в умовах кімнати для проведення випробувань протягом
7-и днів. Миші були отримані з розплідника лабораторних тварин СПДФО “О.Ю.
Шаповалов” (м. Харків) та проходили згідно з діючими нормами карантин протягом
14-и днів і акліматизацію [75]. Утримання тварин відповідало діючим правилам по
пристроях, обладнанню та утриманню віваріїв. Тварини отримували стандартне
харчування відповідно до діючих норм [32,66,75]. З тваринами поводились згідно
з вимогами комісії з біоетики НФаУ та «Загальними етичними принципами
експериментів на тваринах» [32], що узгоджуються з положеннями “Європейської
конвенції по захисту хребетних тварин, яких використовують для
експериментальних та наукових цілей” (Страсбург, 1986 р. із змінами, внесеними
в 1998 р.).
Основними принципами при виборі моделей та методів експериментального
фармакологічного дослідження мазі “Естан” є їх відповідність поставленим
завданням, відтворюваність, достатня інформативність та вартість проведення. В
дисертаційній роботі було використано 13 експериментальних моделей та
застосовано фармакологічні, біохімічні, гематологічні, патоморфологічні,
фізіологічні, токсикологічні і статистичні методи дослідження.
Для скринінгових досліджень вибрані п’ять варіантів композиції мазі на
комбінованій поліетиленоксидній основі (ПЕО-400, ПЕО-1500), що містять у 100 г
різну кількість екстракту насіння каштана кінського – 1,0 г; 3,0 г; 5,0 г; 10,0
г;15,0 г, екстракту кори дуба – 3,0 г та лідокаїну гідрохлориду – 2,0 г.
Скринінгове дослідження протизапальної активності (ПА) мазей проводили на
моделі термічного запалення на 48-и білих мишах самках масою 18-20 г. Миші були
сформовані у 6 груп по 8 тварин у кожній. Запалення відтворювали шляхом
занурення задньої правої лапи мишей у гарячу воду з температурою 66,5±0,5 оС на
4 секунди. Лікування тварин мазями, які наносили нашкірно тонким шаром у дозі
25 мг/см2 [78] на обпечену стопу мишей, проводили 2 рази: відразу після опіку
та через 2-і години після нього. Через 24 години після відтворення запалення
мишей виводили з експерименту за допомогою дислокації шийних хребців під
ефірним наркозом. У тварин відрізали обидві задні лапки на рівні
надступаковогомілкового суглоба, зважували на торсійних вагах марки „ВТ-500” і
визначали різницю в масі між набряклою і здоровою лапами [113]. ПА
досліджуваних об’єктів у відсотках визначали за формулою 2.1:
ПА =
Мк –Мд
х 100%
(2.1), де
Мк
ПА – протизапальна активність у %;
Мк – середня різниця в масі між набряклою та ненабряклою лапами в групі
позитивного контролю;
Мд – середня різниця в масі між набряклою та ненабряклою лапами в дослідній
групі.
У результаті скринінгових досліджень була обрана мазь №4, що містить 10,0 г
екстракту насіння каштана кінського, яка отримала назву “Естан” і стала
предметом подальшого фармакологічного дослідження. Склад діючих речовин обраної
мазі: екстракт насіння каштана кінського в перерахуванні на суху речовину –
10,0 г, екстракт кори дуба в перерахуванні на суху речовину – 3,0 г, лідокаїну
гідрохлорид в перерахуванні на 100% речовину – 2,0 г. Допоміжні речовини: олія
касторова – 5,0 г, поліетиленоксиди (ПЕО 1500 – 28,72 г, ПЕО 400 – 51,08 г),
метилпарагідроксибензоат (ніпагін) – 0,15 г, пропілпарагідроксибензоат
(ніпазол) – 0,05 г. Маса 100 г. За фізичним станом – це гідрофільна комбінована
мазь м’якої однорідної консистенції від світло-коричневого до коричневого
кольору. Допускаються вкраплення.
При вивченні фармакологічної активності мазі “Естан” препаратами порівняння за
спектром фармакологічної дії та найбільш відповідні складу досліджуваної мазі
були обрані зареєстровані на ринку України „Венозний гель Др. Тайсс”
виробництва Др. Тайсс Натурварен ГмбХ, (Німеччина) та супозиторії „Гемороль”,
виробництва „Herbapol” AT (Польща). Також препаратами порівняння були обрані
мазь “Геморон” виробництва ФАРМАСАЙНС Інк. (Канада) та мазь „Ауробін”
виробництва Gedeon Richter (Угорщина). Обидва ці препарати традиційно
застосовуються у клінічній проктології.
До складу препарату „Венозний гель Др. Тайсс” входить екстракт насіння каштана
кінського та екстракт квітів календули. Екстракт насіння каштана кінського
проявляє протизапальні, анальгетичні, мембраностабілізуючі, антикоагулянтні,
венопротекторні та репаративні властивості [52,56,225,237,256,268]. Екстракт
квітів календули за рахунок БАР, що входять до його складу, проявляє
протизапальну, анальгетичну та антибактеріальну (бактерицидну) дію
[41,105,132,165,177,214].
Супозиторії „Гемороль” містять у своєму складі екстракт насіння каштана
кінського, екстракт суцвіття ромашки лікарської, екстракт трави саротамнусу
віникового, екстракт корен
- Київ+380960830922