ЗМІСТ
ЗМІСТ.
ПЕРЕЛІК УМОВНИХ ПОЗНАЧЕНЬ .
ВСТУП
Актуальність теми
Зв'язок досліджень з науковими програмами, планами, темами.
Мета і завдання дослідження .
Наукова новизна одержаних результатів
Практичне значення одержаних результатів .
Особистий внесок здобувача
Апробація результатів дослідження
Публікації.
Розділ 1.
ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ
1.1.TGFbeta: СИНТЕЗ, СЕКРЕЦІЯ І АКТИВАЦІЯ, СИГНАЛІНГ І
БІОЛОГІЧНІ ЕФЕКТИ .
1.1.1. Синтез і сигналінг TGFbeta1.
1.1.2. Біологічні ефекти TGFbeta .
1.1.3. Секреція і активація TGFbeta .
1.2. РОЛЬ TGFbeta У СТРУКТУРНО-ФУНКЦІОНАЛЬНИХ ЗМІНАХ
ПОЗАКЛІТИННОГО МАТРИКСУ ЗА ГІПЕРГЛІКЕМІЇ. СТАН
ПРОБЛЕМИ.
1.2.1. Механізми активації TGFbeta за підвищення концентрації
глюкози
1.2.2. Відомості про стан позаклітинного матриксу мезангіальних
клітин за підвищення концентрації глюкози. Роль TGFbeta1
1.2.3. Відомості про стан позаклітинного матриксу дермальних
фібробластів за підвищення концентрації глюкози
1.2.4. Відомості про стан позаклітинного матриксу ендотеліальних
клітин за підвищення концентрації глюкози. Роль TGFbeta1
1.2.5. D-димер фібрину як можливий модулятор структурно-
функціональних властивостей позаклітинного матриксу
ендотеліальних клітин.
Розділ
2.1. МАТЕРІАЛИ і МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ.
2.1.1. Матеріали
2.1.2. Культивування клітин, аналіз їх проліферативних властивостей
і визначення адгезії ендотеліальних клітин до іммобілізованої
гіалуронової кислоти
2.1.3. Визначення секреції білків методом ELISA і експресії CD
методом клітинної ELISA
2.1.4. Визначення концентрації тотального і активного TGFbeta
методом інгібування проліферації клітин MvLu
2.1.5. Визначення експресії мРНК методом RT-PCR та експресії
білків методом Western blotting.
2.1.6. Визначення продукції оксиду азоту, концентрації циклічного
гуанозин монофосфату, лактату і відновленого глутатіону.
2.1.7. Визначення включення радіоактивно мічених попередників
синтезу глікозаміногліканів у гіалуронову кислоту, гепаран сульфат,
хондроітин сульфат і дерматан сульфат
2.1.8. Визначення ступеню N-сульфатування і N-незаміщення
гепаран сульфату і його зв'язування з антитромбіном . .
2.1.9. Вивчення розподілу гіалуронової кислоти за молекулярною масою
і деградації клітинами екзогенної радіоактивно міченої гіалуронової
кислоти
Розділ 3.
РЕЗУЛЬТАТИ ДОСЛІДЖЕНЬ
3.1. МЕТОДИЧНИЙ ПІДХІД ДЛЯ ВИЗНАЧЕННЯ АКУМУЛЯЦІЇ
ГІАЛУРОНОВОЇ КИСЛОТИ І ОКРЕМИХ ГРУП СУЛЬФАТОВАНИХ
ГЛІКОЗАМІНОГЛІКАНІВ
3.2. ФУНКЦІОНУВАННЯ TSP- - ЗАЛЕЖНОГО МЕХАНІЗМУ
АКТИВАЦІЇ TGFbeta У МЕЗАНГІАЛЬНИХ КЛІТИНАХ,
ДЕРМАЛЬНИХ ФІБРОБЛАСТАХ І ЕНДОТЕЛІАЛЬНИХ
КЛІТИНАХ
3.3. РОЛЬ TSP- - ЗАЛЕЖНОГО МЕХАНІЗМУ АКТИВАЦІЇ TGFbeta
У СТРУКТУРНО-ФУНКЦІОНАЛЬНИХ ЗМІНАХ СТАНУ
ПОЗАКЛІТИННОГО МАТРИКСУ МЕЗАНГІАЛЬНИХ КЛІТИН ЗА
ПІДВИЩЕННЯ КОНЦЕНТРАЦІЇ ГЛЮКОЗИ
3.3.1. TSP- - залежна активація TGFbeta у мезангіальних клітинах
за підвищення концентрації глюкози.
3.3.2. Вплив підвищеної концентрації глюкози на експресію і секрецію
фібронектину та PAI- у мезангіальних клітинах. Роль TSP- - залежної
активації TGFbeta1.
3.3.3. Вплив підвищеної концентрації глюкози на акумуляцію
глікозаміногліканів мезангіальних клітин. Роль TGFbeta і його TSP- -
залежної активації для синтезу гіалуронової кислоти.
3.3.4. Роль TSP- - залежної активації TGFbeta у індукції експресії
мезангіальними клітинами фактора росту сполучної тканини за
підвищення концентрації глюкози.
3.4.СТРУКТУРНО-ФУНКЦІОНАЛЬНИЙ СТАН ПОЗАКЛІТИННОГО
МАТРИКСУ ДЕРМАЛЬНИХ ФІБРОБЛАСТІВ І СИСТЕМА TSP- -
TGFbeta ЗА ПІДВИЩЕННЯ КОНЦЕНТРАЦІЇ ГЛЮКОЗИ
3.4.1. Вплив підвищеної концентрації глюкози на експресію і секрецію
фібронектину і PAI- і на акумуляцію різних груп глікозаміногліканів
у дермальних фібробластах.
3.4.2. Експресія і секреція TSP- і TGFbeta у дермальних
фібробластах за підвищення концентрації глюкози.
3.4.3. Властивості дермальних фібробластів хворих на цукровий
діабет -го типу
3.4.4. Система ангіотензин ІІ - рецептори тип- і експресія фактору
росту сполучної тканини у дермальних фібробластах за підвищення
концентрації глюкози.
3.5. РОЛЬ TGFbeta У СТРУКТУРНО-ФУНКЦІОНАЛЬНИХ ЗМІНАХ
СТАНУ ПОЗАКЛІТИННОГО МАТРИКСУ ЕНДОТЕЛІАЛЬНИХ
КЛІТИН ЗА ПІДВИЩЕННЯ КОНЦЕНТРАЦІЇ ГЛЮКОЗИ
3.5.1. Вплив підвищеної концентрації глюкози на секрецію
фібронектину і PAI- ендотеліальними клітинами
3.5.2. Вплив підвищеної концентрації глюкози на акумуляцію
глікозаміногліканів ендотеліальних клітин
3.5.3. Секреція і активація TGFbeta в ендотеліальних клітинах за
підвищення концентрації глюкози.
3.5.4. Роль TGFbeta в індукції підвищеною концентрацією глюкози
секреції фібронектину і PAI- ендотеліальними клітинами
3.5.5. Роль TGFbeta в індукції підвищеною концентрацією глюкози
змін акумуляції глікозаміногліканів ендотеліальних клітин.
3.5.6. Можливий механізм активації TGFbeta у ендотеліальних
клітинах за підвищення концентрації глюкози.
3.6. ВПЛИВ D-ДИМЕРУ ФІБРИНУ НА СТРУКТУРНО-
ФУНКЦІОНАЛЬНИЙ СТАН ПОЗАКЛІТИННОГО МАТРИКСУ
ЕНДОТЕЛІАЛЬНИХ КЛІТИН.
3.6.1. Вплив D-димеру на акумуляцію і властивості
перицелюлярного гепаран сульфату і секрецію PAI-
ендотеліальними клітинами
3.6.2. Дослідження причетності молекули міжклітинної адгезії- до
індукованих D-димером змін акумуляції і властивостей гепаран
сульфату ендотеліальних клітин.
3.6.3. TSP- - залежна активація TGFbeta під впливом D-димеру.
Розділ 4.
ОБГОВОРЕННЯ ОТРИМАНИХ РЕЗУЛЬТАТІВ
4.1. КЛЮЧОВА РОЛЬ TSP- - ЗАЛЕЖНОЇ АКТИВАЦІЇ TGFbeta
У ДЕЗОРГАНІЗАЦІЇ ПОЗАКЛІТИННОГО МАТРИКСУ
МЕЗАНГІАЛЬНИХ КЛІТИН ЗА ПІДВИЩЕННЯ КОНЦЕНТРАЦІЇ
ГЛЮКОЗИ .
4.2. НЕЗАЛЕЖНІСТЬ ІНДУКОВАНИХ ПІДВИЩЕННЯМ
КОНЦЕНТРАЦІЇ ГЛЮКОЗИ ЗМІН ПОЗАКЛІТИННОГО МАТРИКСУ
ДЕРМАЛЬНИХ ФІБРОБЛАСТІВ ВІД TGFbeta1
4.2.1. Підвищення концентрації глюкози не впливає на експресію і
секрецію TSP- і TGFbeta, але стимулює акумуляцію гіалуронової
кислоти і синтез фібронектину у дермальних фібробластах.
4.2.2. Активація системи ангіотензин ІІ - рецептори тип- і індукція
експресії фактору росту сполучної тканини у дермальних
фібробластах опосередковують стимуляцію синтезу і
секреції фібронектину за підвищення концентрації глюкози.
4.2.3. Специфічність фенотипу дермальних фібробластів хворих
на цукровий діабет -го типу з хронічними виразками стопи.
4.3. РОЛЬ TGFbeta У ДЕЗОРГАНІЗАЦІЇ ПОЗАКЛІТИННОГО
МАТРИКСУ ЕНДОТЕЛІАЛЬНИХ КЛІТИН ЗА ПІДВИЩЕННЯ
КОНЦЕНТРАЦІЇ ГЛЮКОЗИ.
4.3.1. Непричетність TSP- до активації TGFbeta в ендотеліальних
клітинах за підвищення концентрації глюкози
4.3.2. TGFbeta опосередковує збагачення позаклітинного матриксу
ендотеліальних клітин гіалуроновою кислотою за підвищення
концентрації глюкози
4.4. СТРУКТУРНО-ФУНКЦІОНАЛЬНІ ЗМІНИ СТАНУ
ПОЗАКЛІТИННОГО МАТРИКСУ ЕНДОТЕЛІАЛЬНИХ КЛІТИН
ПІД ВПЛИВОМ D-ДИМЕРУ ФІБРИНУ
Розділ 5.
ЗАКЛЮЧЕННЯ.
ВИСНОВКИ.
ПЕРЕЛІК ЦИТОВАНОЇ ЛІТЕРАТУРИ
ПЕРЕЛІК УМОВНИХ ПОЗНАЧЕНЬ
AGE - кінцеві продукти неензиматичного гликозилювання;
AngII - ангіотензин ІІ;
AT - рецептор тип- до ангіотензину ІІ;
AT - рецептор тип- до ангіотензину ІІ;
AT - антитромбін;
AS - антисенс олігонуклеотид до тромбоспондину-;
L-asc - L-аскорбінова кислота;
BH - тетрагідробіоптерин;
СD - головний рецептор гіалуронової кислоти;
CS - хондроітин сульфат;
CTGF - фактор росту сполучної тканини;
DD - D-димер фібрину;
DS - дерматан сульфат;
EGF - епідермальний фактор росту;
bFGF - фактор росту фібробластів-;
gamma - амінокислотна послідовність NNQKIVNLKEKVAQLEA, що
відповідає фрагменту ?- фібриногену;
GAPDH - гліцеральдегідфосфат дегідрогеназа;
GSH - відновлений глутатіон;
cGMP - циклічний гуанозин монофосфат;
sGAG - сульфатовані глікозаміноглікани;
HA - гіалуронова кислота;
HAS - гіалуронан синтази;
HS - гепаран сульфат;
Hyal - гіалуронідази;
ICAM- - молекула міжклітинної адгезії-;
MMP - матриксні металопротеінази;
NDST - N-деацетилаза/N-сульфотрансфераза
L-NMMA - NG-монометил-L-аргінін
NO - оксид азоту;
NO- - нітрит аніон;
eNOS - ендотеліальна синтаза оксиду азоту;
PAI- - інгібітор активатору плазміногену тип-;
PKC - протеїнкіназа С;
ROS - активні метаболіти кисню;
TGFbeta - трансформувальний фактор росту beta;
TSP- - тромбоспондин-;
W-пептид - синтетичний пептид GGWSHW, аналог послідовності
тромбоспондину-, критично важливої для активації
трансформувального фактору росту beta
Y-пептид - синтетичний пептид GGYSHW
ВСТУП
Актуальність