- 2-
Содержание
Содержание ..................................................... 2
Общая характеристика работы .................................... 4
1. Генетический контроль скорости индуцированного соматического мозаицизма у Drosophila melanogaster ............. 9
2. Материал и методика.........................................4 5
2.1.Линии дрозофилы ........................................ 45
2.2.Получение синхронных яйцекладок у дрозофилы .............. 48
2.3.Препараты и обработка ими личинок ........................ 49
2.4.Воздействие тепловым шоком ............................... 50
2.5.Методика проведения SMART-анализа ........................ 50
2.6.Учёт доминантных деталей ................................. 52
2.7.Статистическая обработка результатов экспериментов ..53
3. Новые тест-системы в SMART-анализе - mus(2)201Gl;mwh,
1 (1) ts403;mwh и 1 (1) ts403;mus (2) 201G1;mwh.................55
3.1.Генетические особенности новых линий Dr.melanogaster .. 55
3.2.Возможности использования новых тест-систем в SMART-анализе для оценки генетического риска прямых и. косвенных мутагенов ........................................ 57
3.2.1 Анализ частоты соматического мозаицизма ............. 59
3.2.2. Анализ зависимости соматического мозаицизма от дозы мутагена...................................................65
3.2.3. Модификация частоты соматического мозаицизма тепловым шоком ........................................... 69
4.П роблема истинных и ложных мутантных пятен mwh в методе SMART у Drosophila melanogaster ............................... 73
4.1.Анализ природы морфозных клонов .......................... 73
4.2.Зависимость образования морфозных пятен mwh от типа мутагена и от его дозы......................................7 9
4.3.Изучение морфогенной активности теплового шока ........... 83
- 3-
5. Характеристика линий mus(2)201G1;mwh/+, 1(1)ts403;mwh/+ и 1(1)ts403;mus(2)201G1;mwh/+ по показателю летальности
потомства на разных стадиях развития ........................ 90
5.1.Исследование генетической детерминированности спонтанной доминантной летальности у мутантных линий
дрозофилы..................................................... 91
5.2.Определение чувствительности тестерных линий дрозофилы
к токсическому эффекту мутагенов ............................. 95
5.3.Модификация гипертермией токсичности этиленимина и
диэтилнитрозоамина...........................................100
Заключение....................................................104
Выводы и рекомендации ........................................ 108
Список использованных источников •.............................110
Приложения....................................................141
эмбриогенеза (38,39,58) и влияния на частоту индуцированного соматического мозаицизма генотипа различных линий дрозофилы (42, 64) .
Системы II группы относительно недавно разработаны и введены в практику мутационных исследований: white-zeste
система в 1984 г. В. Rasmuson (67), a white-ivory система в 1986 г. М.М. Green (71).
При своём фенотипическом различии они имеют отдельное сходство в своей генетической структуре и в механизме образования мозаичных клонов. Система white-zeste, кроме рецессивной мутации zeste, обеспечивающей жёлтый цвет глаз у мух, имеет нестабильный частично дуплицированный w+ локус и интегрированный вблизи крайней правой стороны комплекса транспозиционный мобильный элемент (168). В системе цвета глаз white-ivory (ivory - цвет слоновой кости) имеется тандемная квадрипликация на w1 гене (72) .
Причиной изменения первоначального цвета глаз в обеих тест-системах, в основном, является потеря части дуплицированного участка, но механизм этого процесса детально ещё не изучен.
Зарубежные исследователи в последнее время достаточно широко используют white-zeste и white-ivory системы для анализа на генотоксичность и мутагенную активность химических веществ различных классов (42,67,69-74), а также для изучения экспрессии ряда других мутантных генов (68). В отечественной литературе аналогичных исследований мы не встретили.
В настоящее время в скрининг-программах на дрозофиле широкое распространение получил тест на соматический мозаи-цизм, учитывающий различные генетические события в клетках
- 19-
крьша, з связи с его экономичностью и быстротой. Детальная разработка этого теста, получившего впоследствии название SMART (Somatic Mutation and Recombination Test) - анализа, принадлежит U. Graf и F.Wurgler (41).
В этом анализе используются крыловые маркеры: mwh (multiple wing hairs; 3-0,0) - рецессивная мутация, приводящая в гомозиготном состоянии к множественным трихомам на клетку вместо нормы - единичной трихомы; fir(flare; 3-39,0)-зиготическая рецессивная деталь, но гомозиготные (и возможно, гемизиготные) по этой аллели клетки з имагиальных дисках крыльев выживают и имеют уродливые короткие и утолщённые трихомы. Сохраняется эта мутация на балансёрной хромосоме с инверсиями типа TMl, ТМ2 или ТМЗ, которая ещё дополнительно маркирована мутацией Ser(Serrate; 3-92,5) с видимым проявлением в виде зырезки на крыльях (106).
SMART-анализ проводят на крыльях мух генотипа mwh+/+flr, которые составляют половину от общего числа потомства в скрещивании gmwh/mwh х dflr+/+TM3. Являясь трансгетерозиготами по двум маркерам в левом плече третьей хромосомы, мухи могут быть использованы для изучения соматической рекомбинации в клетках крыла. Так, рекомбинация между центромерой и fir приводит к двойным пятнам mwh/fir, состоящим из двух соседних клонов клеток, представляющих mwh и fir фенотипы соответственно (рис.З,А). Соматическая рекомбинация между маркерами mwh и fir приводит к mwh одиночным пятнам (рис. 3, А) . Теоретически можно предположить образование fir - пятен в результате двойного кроссинговера между мутантными аллелями mwh и fir и fir и центромерой (рис.3,5). Но, видимо, это событие происходит крайне редко и вклад его
- Київ+380960830922