2
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ 5
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 10
1:1. Характеристика возбудителя .....................................10
1.1.1. ТАКС01ЮМИЧЕСКОЕ ПОЛОЖЕНИЕ ХЛАМИДИЙ............................. 10
1.1.2. Морфология и цикл развития хламидий 12
1.1.3. Химический состав хламидий 14
1.1.4. Антигенная структура и иммуногенные свойства хламидий 16
1.2. Лабораторная диагностика хламидиоза...............................19
1.2.1. Выявление морфологических структур возбудителя в исследуемом материале 21
1.2.2. Выделение и культивирование хламидий . * 22
1.2.3. Индикация и идентификация антигенов хламидий 23
1.2.4. Генодиагностика хламидиоза 26
1.2.5. Выявление противохламидийных антител 27
1.3. Специфическая профилактика хламидиоза.............................32
1.4. Хламидиоз домашних плотоядных животных (собак и кошек) 34
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 38
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 38
2.1. Эиизоотологическое обследование 38
2.2. Опытные животные „ % 39
2.3. Сыворотки и патологический материал 39
2.4. Индикация возбудителя в патологическом материале. 39
2.5. Серологические реакции 39
2.6. Штаммы хламидий 41
2.7. Получение хламидийного антигена для иммуноферментного анализа 43
2.8. Разработка инактивированной вакцины против хламидиозов плотоядных 44
2.9. Статистическая обработка результатов исследований 47
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 48
3.1. Степень распространения хламидийных инфекций среди поголовья домашних плотоядных животных..........................................48
3.2. Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления хламидийных антител...................................................54
3.2.1. Подбор метода получения хламидийного антигена 54
3.2.3. Конструирование иммуноферментной тест-системы для выявления хламидийных
антител 58
3.2.4. Сравнительное изучение эффективности РСК и ИФА для ретроспективной
диагностики хламидиоза домашних плотоядных 64
3.3. Серологический скрининг домашних плотоядных животных в
отношении хламидийной инфекции....................................69
3
3.4. Разработка специфического препарата для профилактики
хламидиоза ПЛОТОЯДНЫХ животных................................. 7 1
3.4Л. Получение инактивированной эмульсионной вакцины против хламидиоза
плотоядных животных 71
3.4.2. Изучение безвредности, антигенной активности и иммуногенности вакцинного
препарата для профилактики хламидиоза плотоядных животных в лабораторных условиях 73
3.4.3. Иммуноморфологическая оценка вакцины против хламидиоза плотоядных
животных (ВНИВИ) 77
3.4.4. Сравнительная оценка различных биопрепаратов для специфической профилактики
хламидиоза домашних плотоядных 81
3.4.5. Использование инактивированной вакцины против хламидиоза плотоядных
животных в ветеринарной практике 85
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ 89
5. ВЫВОДЫ 103
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 105
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 107
ПРИЛОЖЕНИЯ
135
14
167, 181, 230). Инвагинация участка плазмалеммы с адсорбированным ЭТ происходит в цитоплазму с образованием фагоцитарной вакуоли (170, 224, 231). Эта фаза занимает 7-10 часов. После этого уже в клетке в течение 6-8 часов происходит реорганизация ЭТ в вегетативную форму - ретикулярные тельца, способные и росту и делению. Размножение хламидий ведет к формированию включений, известных под названием телец Провачека. В течение 18-24 часов развития они локализованы в цитоплазматическом пузырьке, образованном из мембраны клетки хозяина. Остановка процесса на этот стадии ведет к перси-стенции хламидийной инфекции. Использование методов ультраструктурного анализа позволило доказать возможность персистирования хламидий в эпителиальных клетках и фибробластах инфицированных слизистых оболочек. Пер-систирование инфекции в организме может продолжаться в течение нескольких лет (13, 75).
Продолжительность процесса созревания РТ через переходные (промежуточные) тельца в ЭТ составляет 36-42 часа (54, 133, 147, 167, 212). Хламидии могут высвобождаться из инфицированной клетки через узкий ободок цитоплазмы. При этом клетка'можег сохранять жизнеспособность, этим можно объяснить бессимптомность течения хламидийной инфекции (287).
Выход инфекционного потомства составляет от 200 до 1000 на одно элементарное тельце. Для этого ретикулярное тельце должно поделиться от 8 до 10 раз, т.е. пройти 8-10 клеточных циклов во время одного цикла развития (82).
1.1.3. Химический состав хламидий
Наиболее сложны по химической структуре оболочки хламидий. При их частичном растворении высвобождается материал, идентифицированный как белково-углеводно-липидный комплекс с молекулярной массой от 400 до 500кД. Содержание белка в этом соединении достигает 50%, углеводов - 40%, липидов - 9%. В составе белков присутствуют все аминокислоты, кроме арги-
15
нина и гистидина, фосфолипиды представлены в виде лецитина и нейтральных жиров, углеводы богаты гексозамином (54, 195, 214, 229).
Но результатам исследований Н.М. Jenkin (196) в оболочке хламидий имеется мурамовая кислота, что делает их чувствительными к действию пенициллина (214). Некоторые виды хламидий чувствительны к сульфаниламидам, что обуславливается наличием у них ферментов, участвующих в синтезе фолиевой кислоты (160).
Длительное время считалось, что хламидии являются облигатными внутриклеточными энергетическими паразитами, использующими метаболическую энергию эукариотической клетки в виде АТФ, ГТФ и других макроэргических соединений (188, 227, 228). В настоящее время анализ генома показал, что хламидии способны синтезировать АТФ, х.отя и в незначительных количествах, путем гликолиза и расщепления гликогена. Некоторые факты, обнаружены в ходе исследований, не нашли своего объяснения в связи с тем, что хламидии в процессе приспособления к внутриклеточному паразитизму выработали уникальные структуры и биосинтетичские механизмы, не имеющие аналогов у других бактерий. У хламидий отсутствует пептидогликан - компонент клеточной стенки существующий как у грамположительных, так и у грамотрицатель-ных бактерий, но при этом в геноме содержатся гены, кодирующие белки, которые необходимы для его полного синтеза (291, 288).
В отличие от вирусов хламидии содержат оба типа нуклеиновой кислоты - РНК и ДНК. Количество ДНК является величиной сравнительно постоянной и составляет 3-3,5%; содержание PIIK меняется в пределах от 2 до 7% в зависимости от стадии развития хламидий (214).
Генетический аппарат ЭТ представлен одной молекулой ДНК, упакованной в нуклеоид. PIIK содержится в рибасомах (191).
Неразорванные молекулы ДНК разных штаммов содержат от 0,6 до 1,1 х 1Ö6 пар нуклеотидов (202, 259).
- Киев+380960830922