Оценка качества и стандартизация композиций на базе диквертина

2
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ 4
ГЛАВА 1
Характеристика диквертина и компонентов комбинированных препаратов на его основе (обзор литературы) 9
1.1 Флавоноиды 9
1.1.1. Классификация и строение 9
1.1.2. Антиоксидантные свойства 20
1.1.3. Физико-химические методы исследования 23
1.1.4. Состав и стандартизация диквертина 29
1.2. Аскорбиновая кислота 31
1.3. Ацетилсалициловая кислота 33
1.4. (1-Каротин 35
1.5. Фармакологические аспекты исследования диквертина и комбинированных препаратов на его основе 37
1.5.1. Диквертин 38
1.5.2. Асковертин 40
1.5.3. Саливертин 43
1.5.4. Каровертин 44
ГЛАВА 2
Анализ и стандартизация комбинированных препаратов на базе
диквертина (обсуждение результатов) 46
2.1. Обоснование методических подходов к анализу многокомпонентных смесей на базе диквертина 46
2.2. Физико-химическая характеристика дигидрокверцетина как стандартного образца 49
2.3. Анализ и стандартизация диквертина 62
2.4. Способ определения дигидрокверцетина в растительном сырье 68
2.5. Разработка методов анализа диквертина и аскорбиновой кислоты -действующей основы комбинированного препарата «Асковертин» 71
3
2.5.1. Спектрофотометрический метод анализа асковертина с предварительной твердофазной экстракцией компонентов 71
2.5.2. Разработка унифицированной методики анализа асковертина методом ВЭЖХ 74
2.6. Разработка методов анализа диквертина и ацетилсалициловой кислоты - действующей основы разрабатываемого
комбинированного препарата «Саливертин» 80
2.6.1. Спектрофотометрический метод анализа саливертина с предварительной твердофазной экстракцией компонентов 80
2.6.2. Разработка унифицированной методики анализа саливертина методом ВЭЖХ 83
2.7. Разработка методики анализа БАД «Каровертин» и ее оптимизация 91
2.8. Валидация методик анализа композиций на базе диквертина 94
2.8.1. Валидация методики хроматографического анализа препарата диквертин 98
2.8.2. Валидация методики хроматографического анализа препарата асковсртин 103
2.8.3. Валидация методики хроматографического анализа разрабатываемого препарата саливертин 107
ГЛАВА 3
Экспериментальная часть 113
3.1. Объекты исследования 113
3.2. Методы исследования 113
3.3. Подготовка проб и условия эксперимента 114
3.4. Формулы количественных расчетов 118
ВЫВОДЫ 121
ЛИТЕРАТУРА 123
ПРИЛОЖЕНИЕ
13
Если атомы С-2 и С-3 связаны двойной связью, т. е. находятся в состоянии 5/?2-гибридизации, то это обусловливает псевдоароматические свойства кольца С и, как следствие, плоскую конфигурацию всей молекулы.
Типичным представителем таких соединений является флавонол кверцетин. С помощью полусферических молекулярных моделей Стюарта-Бриглеба наглядно иллюстрируется его плоское строение (рис. 1.1, А). Результаты рентгеноструктурного анализа кверцетина также подтверждают копланарность бензопиранового фрагмента и фенильного заместителя в нем [148]. Расположение всех атомов в одной плоскости обеспечивает возможность перекрывания их /?-орбиталей с образованием единого сопряженного я-электронного облака.
►
Рис. 1.1. Молекулярные модели молекул кверцетина (А) и дигидрокверцетина (Б)
Если атомы С-2 и С-3 связаны одинарной связью, т. е. находятся в состоянии 5/?3-гибридизации, то следствием этого является нарушение копланарности в пространственном расположении и появление в молекуле центров хиральности.
Гетероциклическое кольцо С в этих соединениях не имеет плоского строения и находится в конформации полукресла [137, 179].
Связи у атомов С-2 и С-3 могут иметь экваториальную или аксиальную направленность, только она выражена не так четко, как в обычной конформации кресла (часто их называют пссвдоэкваториальными и псевдоаксиальными).
14
Типичным представителем соединений с таким пространственным строением гетероциклического фрагмента является флаванонол дигидрокверцетин. С помощью молекулярных моделей Споарта-Бриглеба и моделей Дрейдинга на примере одного из наиболее устойчивых стереоизомеров дигидрокверцетина наглядно показано неплоское строение кольца С и диэкваториальное положение заместителей -фенильного кольца и гидроксильной группы (рис. 1.1, Б). По данным рентгеноструктурного анализа дигидрокверцетина боковое фенильное кольцо повернуто на 80° по отношению к средней плоскости бензопирановой системы [79].
Во флаванонах содержится один асимметрический атом углерода С-2, во флаванонолах два - С-2 и С-3. Наличие центров хиральности предопределяет существование оптически активных стереоизомерных форм:
• у флаванонов - двух энантиомеров;
• у флаванонолов - четырех стереоизомеров.
Для природных флаванонов наиболее характерна 25-конфигурация хирального атома углерода С-2 и экваториальное положение фенильного кольца В [137, 179].
Для подавляющего большинства природных флаванонолов известна как наиболее стабильная 2/?,ЗД-конфигурация, соответствующая транс- форме с экваториальным положением арильного заместителя у хирального атома углерода С-2 [137, 179]. Четыре возможные стереоизомерные формы флаванонолов приведены на примере дигидрокверцетина (рис. 1.2).
Стереоизомер с 25,35-конфигурацией является энантиомером «обычного» (2/?,3/?)-дигидрокверцетина (см. рис. 1.2). Эти соединения имеют противоположную конфигурацию хиральных центров С-2 и С-3. У этой пары энантиомеров атомы Н-2 и Н-3 находятся в транс-положении. Подтверждением служит то, что по данным спектра ЯМР ’Н константа спин-сгшнового взаимодействия (КССВ) для них в том и другом соединениях равна 11,7 - 11,8 Гц.
Два других стереоизомера - (25, ЪК) и (2/?,35) - также имеют
противоположную конфигурацию хиральных центров С-2 и С-3, т. е. являются энантиомерами (см. рис. 1.2). У каждого из них атомы Н-2 и Н-3 находятся в цис-положении, что подтверждается значениями КССВ, равными 2,8 Гц.