Иммунобиологический статус и морфофункциональные изменения в лимфоидных органах при цирковирусной инфекции свиней

2
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ............................................................4
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.................................................8
1.1. Классификация и токсономия цирковирусов........................8
1.2. Биологические свойства вирусов семейства Сігсоуігісіае........10
1.3. Методы выделения и культивирования ІДВС-2.....................15
1.4. Сравнительная патология и патогенность ЦВС-2..................17
1.5. Болезни, обусловленные ЦВС-2 (цирковирусные болезни)..........20
1.6. Иммуносупрессия и сопутствующие инфекции как элементы цирковирусных инфекций.............................................33
1.7. Роль иммунной активации в патогенезе СПМИС....................36
1.8. Экспериментальное заражение поросят вирусом ЦВС-2.............39
1.9. Заключение....................................................42
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ........................................48
2.1. Материалы, методы и объемы исследований.......................48
2.2. Результаты исследования зпизоотолої ической ситуации по болезням свиней в Ростовской области........................................52
2.3. Сопутствующие инфекции при синдроме мультисистем ного истощения свиней.............................................................64
2.4. Особенности клинического течения цирковирусной инфекции у свиней.............................................................67
2.5. Морфологические исследования крови у свиней с синдромом послеогьемного мультисистемного истощения..........................69
2.5.1. Показатели красной крови у свиней с синдромом послеогьемного мультисистемного истощения.........................................69
2.5.2. Показатели белой крови у свиней с синдромом послеогьемного мультисистемного истощения.........................................74
2.5.3. Биохимические исследования крови у свиней с синдромом послеогьемного мультисистемного истощения..........................82
з
2.6. Результаты изучения иммунологического статуса у поросят с СПМИС...................................................90
2.7. Морфофункциональная характеристика лимфатических узлов свиней при цирковирусной инфекции.................................102
3. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ...................119
4. ВЫВОДЫ..............................................126
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ............................128
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ...................................129
ПРИЛОЖЕНИЕ..............................................156
15
1.3. Методы выделения н культивирования ЦВС-2
ЦВС-2 был выделен из тканей поросят, больных СПМИС, в свободной
от ЦВС-1 перевиваемой культуре клеток РК-15. Кроме того, ЦВС-2 был выделен из тканей абортированных плодов и почек поросят с дерматитом и синдромом нефропатии (СДНП) (В.М. Meehan et al., 2001; В. O’Connor et al., 2001; K.W. West et al., 1999; J. Choi et al., 2002). Размножаясь в культуре клеток, ЦВС не развивает ЦПД в титре 4.3-5.5 lg ТЦЦзолш- Инфицированные клетки обнаруживаются РИФ и иммунопсроксидазным окрашиванием (G.M. Allan et al., 1999; S. Krakowka et al., 2000). Репликация вирусной ДНК ЦВС происходит в ядре и, так как вирус не имеег своей полимеразы, репликация зависит от ферментов клетки хозяина, синтезированных в S-фазе клеточного цикла (М. Goryo et al., 1987; I. Tischer et al., 1987; M. Gassmann et al., 1988).
Были проведены испытания других культур клеток для выделения и культивирования цирковирусов. В работе, проведенной Цетрапьной ветеринарной лабораторией Великобритании (S. Edwards, J.J. Sands, 1994), было испытано 12 клеточных культур (к/к): РК-15 (перевиваемая к/к почки поросенка, Дания), LLC-PK (почка поросенка, Англия), SK-6 (Kasza почка, Англия), РЕК (почка эмбриона поросенка, Англия), ESK (почка эмбриона поросенка, Япония), SK.-L (почка поросенка L-, Япония), SK-H (почка поросенка Н, Япония), СРК (клональная лшгия почки поросенка, производное от SK-Н, Япония), STE (линия клеток семенников, Германия) и др. В тестах ИФА на присутствие ЦВС, положительные результаты были получены на 4 кулыурах клеток: РЕК, SK-Н, СРК и ESK. В культуре клеток РК-15 в этих исследованиях вирус не был обнаружен, хотя по данным других исследователей (D. Todd ct al., 1991; G.М. Allan et al., 1994), в этой культуре клеток вирус успешно реплицировался (I. Tischer et al., 1987). Возможно, в проведенных исследованиях был использован другой штамм клеток РК-15.
16
В работе других исследователей (G.M. Allan et aL, 1994; R. Larochelle et al., 2003; J.C. Harding et al., 2004) сообщалось, что для культивирования ЦВС было использовано 14 культур клеток разных видов животных: первичная к/к почки поросенка, к/к легкого свиньи, к/к семенников хряка, к/к РК-15, первичная к/к почки КРС, к/к семенников КРС, первичная к/к почки ягненка, к/к печени кур, клетки Vero, ПЕР и HELA. Репликация вируса в культуре клеток оценивалась по наличию антигена в ядрах и наработке вируса при последующих пассажах клеток первично зараженной культуры. Оценку проводили с помощью непрямой реакции иммунофлюоресценции. Рсзз'льтаты проведенных исследований показали, что только культуры тканей поросят и культура клеток Vero чувствительны к инфицированию цирковирусом.
При изучении характера репликации ЦВС-2, I. Tischer et al. (1987), инкубировали зараженные вирусом клетки почки поросенка РК-15, с d-глюкозамином-HCl в дозе 300 мМ в течение I часа при 37°С. Установлено, что глюкозамин стимулирует увеличение числа клеток, содержащих вирусный антиген, примерно в 50 раз, по сравнению с контролем, а также - репликацию ДЕК вируса.
В период репликации вируса в синхронизированной культуре клеток, инфицированной в разные периоды клеточного цикла, как уже упоминалось, синтез ДНК зависит от клеточных энзимов, эскспрессированных в S-фазе роста, то есть, репликация ДНК начинается только при условии прохождения клетками митоза. В клетках, обработанных глюкозамином, после Go или Gi фазы, начало репликации ЦВС происходило в первой S-фазе мосле стимуляции. В контрольной культуре латентный период продолжался до второй S-фазы. Однако, необходимость митоза для начала репликации отпадала, если клетки подвергались трансфекции с помощью ДНК цирковируса в присутствии ДЕАЕ-декстрана или в случаях, когда клетки заражали и в последующем обрабатывали глюкозамином до того, как они вошли в S-фазу после стимуля-