-2-
ОГЛАВЛЕНИЕ
стр.
ВВЕДЕНИЕ.......................................................4
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Виды раувольфии - источники сырья для получения противоаритмических препаратов.............................10
1.2. Культуры тканей растений - продуценты алкалоидов..........13
1.3. Методы выделения алкалоидов из различного сырья...........18
1.4. Противоаритмические препараты на основе аймалина..........21
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Характеристика сырья......................................31
2.2. Методы количественного анализа аймалина и его полусинтетического производного...........................34
2.3. Приборы и методы, используемые для химического изучения и анализа производных аймалина..............................39
ГЛАВА 3. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ
ПРОДУЦЕНТОВ АЙМАЛИНА
3.1. Морфолого-анатомическое изучение коры корней раувольфии рвотной и раувольфии седоватой............................42
3.2. Качественный анализ продуцентов алкалоидов раувольфии......50
3.3. Методы количественного анализа продуцентов алкалоидов
раувольфии..................................................59
3.3.1. Разработка методики количественного определения алкалоидов
раувольфии с помощью ВЭЖХ...............................60
3.4. Особенности накопления алкалоидов в культуре ткани раувольфии змеиной.....................................................70
ГЛАВА 4. ВЫДЕЛЕНИЕ СУММЫ АЛКАЛОИДОВ ИЗ БИОМАССЫ
КУЛЬТУРЫ ТКАНИ РАУВОЛЬФИИ ЗМЕИНОЙ
4.1. Выбор режима экстракции сырья..............................75
-3.
4.2. Сопутствующие вещества биомассы культуры ткани раувольфии змеиной и их исследование.....................................78
4.3. Выбор способа очистки суммы алкалоидов.......................85
ГЛАВА 5. СИНТЕЗ ЧЕТВЕРТИЧНЫХ ПРОИЗВОДНЫХ АЙМАЛИНА
5.1. Синтез и анализ четвертичных производных аймалина с различными галогенид-ионами...................................95
5.2. Технология очистки синтезированных производных аймалина 106
5.2.1. Усовершенствование условий очистки №1АБ, синтезированного на основе суммы алкалоидов.................111
5.3. Получение Ы(4)-пропилаймалиния бензолсульфоната.............119
5.3.1. Технология 1МПАБС из культуры ткани раувольфии змеиной....128
5.3.2. Технология ЫПАБС из природного растительного сырья - коры корней раувольфии рвотной...................................131
ВЫВОДЫ...........................................................134
ЛИТЕРАТУРА.......................................................136
- 15-
способна накапливать в среднем от 8% до 13% берберина, что в 2,5 раза больше чем в корнях взрослого 5-6 летнего растения [86,167].
Известно, что японская компания Mitsui Petrochemical Industries осваивает промышленное производство берберина с использованием культуры клеток Coptis japonica Makino.
Одним из продуцентов алкалоидов, для которых показаны преимущества получения методом клеточной биотехнологии, является культура тканей Taxus brevifolia L. Таксол, продуцируемый клетками Т. brevifolia обладает антимитотическими свойствами. На его основе создан препарат Paclitaxel, который применяется при лечении рака яичников [128, 148]. Таксол впервые был выделен из коры тисса тихоокеанского Taxus brevifolia L. Но использование тисса в качестве сырья для получения таксола ставит под угрозу существование этого медленно растущего растения, так как содержание таксола не превышает 0,01% от массы сухой коры [97]. Таким образом, на сегодняшний день наиболее приемлемым методом получения таксола является культивирование клеток и тканей тисса in vitro. В последние годы получены каллусные и суспензионные культуры некоторых видов тисса (Taxus cuspidate Sieb, et Zucc., Taxus canadensis Marsh., Taxus baccata L.), изучены условия их выращивания и показано, что отдельные каллусные линии стабильно продуцируют таксол в количествах, сопоставимых с интактными растениями [84, 142, 191].
Алкалоидный спектр культуры ткани Catharanthus roseus G. Don состоит главным образом из оснований типа коринантина, главными из которых являются серпентин и аймапицин [155]. Суспензионная культура успешно прошла испытания в многолитровых биореакторах. Выход биомассы, полученной в ферментере вместимостью 20 м1 за 10 суток цикла выращивания, равен 25 г/л при содержании серпентина в клетках не менее 1% от сухой массы [83].
Это позволяет получить 5 кг вещества за 1 цикл выращивания, а в течение года (около 30 циклов) - около 150 кг.
-16-
Серпентин рассматривается учеными западных стран прежде всего как потенциальное сырье, из которого легко полусинтетически получить аймалицин - ценное гипотензивное средство [120, 121, 195].
Димерные алкалоиды винбластин и винкристин, эффективные в лечении злокачественных заболеваний крови, в культуре ткани катарантуса не обнаружены, или отмечены в незначительных количествах [9,10,139].
В нашей стране систематические исследования по культуре тканей были начаты в 1957 г. в Институте физиологии растений АН СССР под руководством Р.Г. Бутенко. В 1965 г. по инициативе профессора И.В. Грушвицкого при кафедре фармакогнозии Ленинградского химико-фармацевтического института была создана группа по изучению культур тканей лекарственных растений. Основными объектами изучения явились культуры тканей тропических видов раувольфии, как возможные продуценты сердечно-сосудистых препаратов и культуры тканей растений сем. Araliaceae, известных своими тонизирующими и адаптогенными свойствами.
В СПХФА на основе изучения культуры ткани раувольфии змеиной Rauwolfia serpentina Benth. был создан ряд штаммов, которые в последнее время культивируются с целью получения высококачественного сырья -продуцента алкалоида аймалина, обладающего противоаритмической активностью.
Содержание аймалина в зависимости от штамма может колебаться от 0,6% до 1,8% [66,68].
Изучением культуры ткани раувольфии вплотную занимаются и за рубежом. Так, уже в течение многих лет ведутся работы с культурой ткани раувольфии в Японии и в Германии [132, 137, 161, 163, 168, 169, 178, 194].
В России на основе штамма К-27, выведенного в СПХФА, были составлены проект временной фармакопейной статьи на биомассу культуры ткани раувольфии и опытно-промышленный регламент на получение биомассы культуры ткани раувольфии - продуцента аймалина. На Харьковском химико-фармацевтическом объединении «Здоровье»
- Киев+380960830922