Стандартизация и контроль качества митоксантрона гидрохлорида

2
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ 6
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 11
1.1. Синтез митоксантрона гидрохлорида 13
1.2. Связь между химической структурой и фармакологической активностью митоксантрона 18
1.3. Физико-химические свойства митоксантрона гидрохлорида 24
1.4. Методы анализа препарата 28
1.4.1. Оптические методы анализа 28
1.4.1.1. Спектрофотометрия в УФ- и видимой частях спектра 28
1.4.1.2. Инфракрасная (ИК-) спектроскопия 32
1.4.1.3. Спектроскопия комбинационного рассеяния
(рамановская спектроскопия) 33
1.4.2. Анализ митоксантрона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) 34
1.4.3. Фармакопейные методы анализа митоксантрона гидрохлорида 40
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 43
Исследование растворимости субстанции 43
Глава 2. ИССЛЕДОВАНИЕ АБСОРБЦИОННЫХ ХАРАКТЕРИСТИК В ИК-, УФ- И ВИДИМОЙ ОБЛАСТЯХ СПЕКТРА 46
2.1. Исследование РЛС-спектров митоксантрона гидрохлорида 46
2.2. Спектрофотометрический анализ митоксантрона гидрохлорида 49
2.2.1. Исследование поглощения водных растворов в видимой и
УФ- областях спектра в зависимости от pH среды 50
2.2.2. Изучение характера подчинения водных и водно-спиртовых растворов митоксантрона гидрохлорида закону
Бугера-Ламберта-Бера 58
3
2.2.2.1. Исследование водных растворов митоксантрона гидрохлорида 59
2.2.2.2. Исследование растворов митоксантрона гидрохлорида, содержащих поверхностно-активные вещества (ПАВ) 66
2.2.2.3. Оптические свойства водно-спиртовых растворов митоксантрона гидрохлорида 72
2.2.2.4. Количественный анализ лекарственной формы методом спектрофотометрии 79
2.2.3. Определение прозрачности лекарственной формы 83
Выводы 86
Глава 3. АНАЛИЗ ЧИСТОТЫ СУБСТАНЦИИ МИТОКСАНТРОНА ГИДРОХЛОРИДА ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ 88
3.1. Применение хроматографии в тонких слоях сорбента 88
3.1.1. Разработка методики контроля чистоты препарата 91
3.1.2. Методики аналитического контроля технологического процесса
на стадиях синтеза митоксантрона гидрохлорида 99
3.2. Определение хроматографической чистоты методом ВЭЖХ 101
3.2.1. Анализ митоксантрона гидрохлорида методом ВЭЖХ в обращенно-фазовом режиме 108
3.2.2.Анапиз митоксантрона гидрохлорида методом ион-парной
ВЭЖХ в обращенно-фазовом режиме 110
Выводы 112
Глава 4. ТИТРИМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ СУБСТАНЦИИ 114
МИТОКСАНТРОНА ГИДРОХЛОРИДА
4.1. Разработка методики титриметрического определения
митоксантрона гидрохлорида в среде протогенных растворителей 118
4.2. Количественное определение митоксантрона гидрохлорида
методом обратного титрования в неводных средах 125
4.3. Оценка результатов титриметрического анализа с использованием линейной зависимости результата определения от навески препарата 128
17
2. Получение лейко-основания митоксантрона - 1,4-ди (оксиэтиламино)этиламино-5,8-диоксиантрахинона:
1,4-ди (оксиэтиламино)этиламино-5,8-диоксиантрахинон
3.Окисление лейкооснования митоксантрона
4. Получение дигидрохлорида митоксантрона
бутанол
2 п-СНз-СбНдИНі
в ДМФА 45-50°С 2,5-3 часа
аргон
На завершающей (четвертой) стадии основание митоксантрона, полученное на стадии 3, растворяют в 1%-ном растворе кислоты хлористоводородной, добавляют активированный уголь, перемешивают, фильтруют через три слоя бумажного фильтра под вакуумом на воронке Бюхнера, добавляют
18
этилцеллозольв, ацетон. После выпадения осадка, его отфильтровывают под вакуумом, трижды промывают смесью растворителей - вода : этилцеллозольв : ацетон (1:1:1,6) - и дважды ацетоном, осадок сушат под вакуумом при комнатной температуре.
1.2. Связь между химической структурой и фармакологической активностью митоксантрона
Механизм действия митоксантрона
Механизм противоопухолевого действия митоксантрона изучается уже более 20 лет. Несмотря на обширный экспериментальный материал, ученые не пришли к единому мнению в этом вопросе [141, 143].
В настоящее время наиболее принято утверждение, что основной механизм противоопухолевого действия митоксантрона аналогичен таковому у антрациклиновых антибиотиков [64, 120, 133]. Согласно экспериментальным данным, молекула митоксантрона, подобно антрациклинам, вклинивается между парами нуклеотидов дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) раковой клетки, нарушая процессы ее транскрипции и трансляции. Это ведет к подавлению биосинтеза нуклеиновых кислот и гибели клетки [125, 134]. Митоксантрон также подавляет синтез ДНК и рибонуклеиновой (РНК) кислот ингибированием митоза, причем действует как на пролиферирующие, так и на непролиферирующие клетки [96, 99]. Препарат индуцирует аберрации клеточных ядер, сопровождающиеся разрывами хромосом, кроме того, вызывает образование поперечных связей между цепями ДНК. Описано дополнительное электростатическое взаимодействие боковых цепей митоксантрона с фосфатными группами нуклеотидов ДНК, приводящее к многочисленным разрывам в ДНК [119, 135]. Исследования последних лет показали, что митоксантрон ингибирует топоизомеразу II, катализирующую изменения топологического состояния ДНК с помощью двунитевого разрыва-сшивания, тем самым он индуцирует апоптоз раковых клеток [66, 83, 161].