РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В данной работе для получения озона и насыщения им растворов была использована
медицинская озонаторная установка российского производства «Медозон».
Максимальная концентрация озона в газовой смеси на выходе прибора - 70 мг/л. Во
всех проведенных нами исследованиях концентрация озона в жидкости определялась
наиболее доступным йодометрическим методом [154, 155]. В колбу для титрования
емкостью 500 мл наливали 400 мл озонированного раствора и добавляли 10 мл 10
%-го раствора иодида калия и 20 мл раствора серной кислоты (1:4). Полученную
смесь перемешивали и давали отстояться 5-7 мин. Затем вносили 2 мл 1 %-го
раствора крахмала. Производили титрование до обесцвечивания 0,1н или 0,01н
раствором тиосульфата натрия. Содержание озона в растворе рассчитывали по
формуле:
Х = , где Х - концентрация озона в исследуемой жидкости, мг/л; n - нормальность
тиосульфата натрия , n = 0,01; 24- коэффициент перевода тиосульфата натрия в
озон; Y - объём тиосульфата натрия, пошедшего на титрование, мл; 1000-
коэффициент пересчёта озона, мл/л; 400 - объём исследуемого озонированного
раствора, мл.
В стандартных условиях формула принимает вид: Х= 0,6Y, мг/л.
Антибактериальная активность озонированного физиологического раствора хлорида
натрия (ОФР) с различным содержанием озона изучали в опытах in vitro в
отношении основных возбудителей (как аэробных, так и анаэробных) острого
перитонита у детей, субоперационно выделенных у больных с гнойным перитонитом
(Staphylococcus aureus, Esherichia coli, Proteus vulgaris, Pseudomonas
aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Bacteroides fragilis, Fusobacterium
necrophorum, Peptococcus sрp anaerobicus), а также эталонных штаммов
(Staphylococcus aureus 25923 АТСС, 209 Р, 906; Esherichia coli 25922 АТСС;
Proteus vulgaris 4636 H; Pseudomonas aeruginosa 27853 АТСС; Klebsiella
pneumoniae 60; Bacteroides fragilis АН 13183; Fusobacterium necrophorum 22;
Peptococcus sрp anaerobicus), полученных из коллекции Государственного НИИ
стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А.
Тарасевича.
Было проведено контрольное исследование, подразумевавшее обработку культур всех
используемых нами микроорганизмов неозонированным стерильным физиологическим
раствором NaCl (ФР) (в табл. 3.1 это отражено как контрольная серия). Суточные
агаровые культуры бактерий смывали с питательного агара 0,9 %-ным раствором
NaCl и готовили рабочие суспензии с заданной концентрацией микробных тел с
помощью оптического стандарта мутности ГНИИ им. Л.А. Тарасевича. Микробная
нагрузка составляла для всех микроорганизмов 10КОЕ / мл.
С помощью озонатора получали озонированный физиологический раствор NaCl с
различным содержанием озона (табл. 3.1), разливали его в мерные колбы по 50 мл,
вносили культуры микробов, во взвеси объемом по 1 мл. Затем через интервалы в
5, 10, 15, 20 мин из каждой колбы по секторам на чашках Петри делали посевы на
твердые питательные среды. В сериях экспериментов с культурами анаэробных
микроорганизмов поступали иначе- на дно пробирки с жидкой питательной средой
(под масло) вводили с помощью шприца озонированный раствор в указанном объеме –
50 мл, затем через вышеуказанные промежутки времени делали пересев культуры в
другой сосуд с питательной средой.
Факультативно- аэробные микроорганизмы выращивали на мясо- пептонном агаре в
чашках Петри в течение 20- 24 ч при температуре 37 С. Аспорогенные анаэробы
культивировали на агаризованной тиогликолевой среде, для контроля стерильности
содержащей гемин и менадион. Посевы помещали в анаэростаты, заполняли газовой
смесью (состав- азот 80 %, углекислый газ 10 %, водород 10 %), выдерживали от 1
до 5 сут при температуре 37С. Кислород удаляли химическим путем с помощью
пирогаллола и безводного углекислого натрия.
Идентификация аэробной флоры осуществлялась на 3-4-е сутки после посева,
анаэробной - на 5-6-е сут [181].
Для морфологического исследования органов экспериментальных животных с целью
определения их реакции на внутрибрюшинное введение ОФР с эффективными
бактерицидными концентрациями озона 48 белых крыс линии Wistar (самки молодого
возраста - 6- 8 мес, вес - 0,21- 0,34 кг) подверглись пункционному промыванию
брюшной полости с помощью ОФР с содержанием озона 8 и 12 мг/л. Объем раствора-
50 мл. Животные были выведены из опыта в сроки 2 , 24 ч, 3, 6 , 9, 12 сут
методом поднаркозной декапитации и соответственно составляли 1-ю, 2-ю, 3-ю,
4-ю, 5-ю и 6-ю группы наблюдения (табл. 2.1).
Таблица 2.1
Группы здоровых животных, подвергнутых внутрибрюшинному введению ОФР для
гистологического исследования
Группы животных
(n = 6)
Сроки выведения из опыта
Состав введенного в БП раствора
2 ч
ОФР , 8 мг/л озона
12 ч
то же
24 ч
то же
3 сут
то же
6 сут
то же
9 сут
то же
7 (контрольная)
2 ч
Физиологический раствор NaCl
8 (контрольная)
произвольный
2 ч
ОФР, 12 мг/л озона
Отдельно наблюдались две контрольных группы животных- подвергнутые введению
такого же объема физиологического раствора NaCl (были декапитированы через 2 ч
после введения в БП жидкости) и интактные животные (соответственно 7-я и 8-я
группы, по 6 животных в каждой). На первом этапе эксперимента 6 животных
подверглись введению ОФР с содержанием озона 12 мг/л и были выведены из опыта
через 2 ч после манипуляции (9-я группа). На основании полученных результатов в
ходе последующих исследований данная концентрация озона в растворе нами не
использовалась.
По вскрытии брюшной полости были взяты образцы тонкой кишки, селезенки, печени,
левой почки, париетальной брюшины с мышцами передней брюшной стенки. Для
приготовления
- Киев+380960830922