РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Материалом для настоящего исследования послужили сборы трематод от черноморских рыб, а также метацеркарий и партенит трематоды Helicometra fasciata от черноморских креветок и брюхоногих моллюсков, выполненные автором в период с 1994 по 2000 г.
Животные-хозяева выловлены у крымского побережья Черного моря: в севастопольских бухтах Голубой, Казачьей, Карантинной, Камышовой, Мартыновой, Песочной, Северной, Стрелецкой, а также бухте радиобиологического корпуса (РБК) Института биологии южных морей НАН Украины; в районе м. Тарханкут, м. Лукулл, м. Фиолент; у Балаклавы, Евпатории, Качи, Карадага (рис. 2.1). Бухты, в которых проводились исследования ПС H. fasciata, расположены на незначительном удалении друг от друга и не разделены естественными или искусственными преградами.
Отлов крупных рыб производили мережевыми сетями и ставными неводами, более мелких рыб (морских собачек, морских игл, уточек и т.п.) добывали на мелководье на удочку, сачком и при помощи ловушек. Креветок и мелких ракообразных отлавливали сачком и мелкоячеистой волокушей, для сбора моллюсков применяли металлический скребок, ловушки и дночерпатель.
Экспериментальные работы проводили в помещениях отдела экологической паразитологии и проточных ваннах аквариального комплекса указанного института.
Всего на наличие трематод исследовано 2 679 экземпляров рыб 56 видов, относящихся к 27 семействам (приложение А, табл. А.1). Видовое определение рыб производили по А.Н. Световидову [118] с учетом изменений в систематике, предложенных Т.С. Рассом [119].
Рис. 2.1. Районы проведения исследований:
А - у побережья Крыма (1994 - 2000 гг.);
Б - в бухтах Севастополя (1998 - 2000 гг.)
Одновременно паразитологическому обследованию подвергнуто 726 креветок рода Palaemon, а также 2 076 экз. моллюсков 20 видов (см. табл. 2.1). Определение моллюсков проводили по [120], креветок - по [121]. Самцов P. elegans определяли по наличию отростка appendix masculina на вторых плеоподах [122]. Поскольку в теле креветок нет никаких образований, позволяющих однозначно установить их возраст, мы придерживались соотношений между размером и возрастом, ранее установленных для черноморских P. elegans [123].
У рыб и креветок измеряли общую длину тела, у брюхоногих моллюсков - высоту раковины, у двустворчатых моллюсков - длину раковины. Гельминтологические вскрытия всех гидробионтов, изготовление постоянных тотальных и гистологических препаратов проводили по общепринятым методикам [124]. Вскрывали только свежевыловленных хозяев, без их предварительного замораживания или фиксации.
Камеральную обработку материала проводили с использованием микроскопов МБС-10, МБИ 11У4.2, Биолам Д-12 и рисовального аппарата
РА-4. Размеры структур и органов трематод, приводимые в тексте, даны в миллиметрах, масштабная линейка на рисунках = 1 мм, если не указано иное.
Строение особей партеногенетического поколения исследовали в капле воды на живых объектах, на объектах, анестезированных нагреванием, а также на окрашенных уксусным кармином тотальных препаратах. Марит, метацеркарий и церкарий изучали живыми на временных, а также на тотальных бальзамовых препаратах. Предварительная фиксация марит перед изготовлением препаратов производилась 70? спиртом под покровным стеклом, в большинстве случаев - без дополнительного прессования.
Содержимое пищеварительного тракта рыб исследовали компрессорным методом. Подсчет червей вели отдельно в верхней, средней, нижней трети тонкой кишки, желудке, пилорических придатках, а также
преанальной ампуле.
Видовое определение трематод выполнено по определителям и монографиям [125 - 127], а также работам отечественных и зарубежных авторов по систематике отдельных таксонов трематод [128 - 131 и др.].
Зараженность хозяев характеризовали, согласно [132], величинами экстенсивности инвазии (процент зараженных особей хозяина в выборке) и средней интенсивности инвазии (среднее число трематод в одной зараженной особи хозяина), численность группировок паразитирующих фаз трематод - индексом их обилия в популяции хозяев (среднее число трематод данной фазы развития, приходящееся на одну особь хозяина в исследованной выборке).
Возрастную структуру гемипопуляции (ГП) марит устанавливали по состоянию половой системы червей, отдельно учитывая ювенильные экземпляры и зрелых особей с яйцами в матке. Степень зрелости марит определяли на полевом материале и по тотальным бальзамовым препаратам.
Анализ морфологической изменчивости марит рода Helicometra выполнен на сериях выборок приблизительно одноразмерных (1,3-1,5 мм) зрелых марит от хозяев, выловленных в летний период года. У каждой особи измерены 17 абсолютных и определены значения 11 относительных признаков (табл. 2.1 - 2.4). Для изучения фенооблика ГП марит H. fasciata исследован 591 экземпляр зрелых червей от 15 видов рыб, отловленных у Севастополя, а также 28 марит этого вида от черного бычка Gobius niger из района Карадага.
Для исследования гостальной изменчивости марит H. fasciata использованы следующие морфофизиологические индикаторы: отношение длины желточников к длине тела (в процентах); доля площади проекции гонад в общей площади проекции тела (в процентах); индекс зрелости марит, рассчитываемый как отношение числа яиц в матке к длине тела червя.
Положение центра брюшной присоски (ЦБП) и относительная длина поля желточников рассчитаны в процентах от общей длины тела мариты.
Таблица 2.1.
Значения статистических параметров пластических признаков марит Helicometra fasciata от разных хозяев
Признаки
маритHelicometra fasciata из:Symphodus tinca
(n=25)Gobius cobitis
(n=25)Scorpaena porcus
(n=25)Blennius pavo
(n=21)случайных хозяев
(n=16)Всей
выборки х+SxCv+Scvх+SxCv+Scvх+SxCv+Scvх+SxCv+Scvх+SxCv+ScvУсред-ненный CvL тела1,545+
0,04113,