ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Нами проведено морфологическое изучение особенностей СОЖ крыс после тимэктомии,
а также в условиях введения циклоферона.
Экспериментальное исследование проведено на 360 белых беспородных
крысах-самцах, полученных из вивария Луганского государственного медицинского
университета. Во время эксперимента лабораторные животные содержались в
соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите
позвоночных животных, используемых для эксперимента и научных целей (Страсбург,
1986 г.). Эксперимент проводился в осенне-зимний период года. До и во время
эксперимента крысы находились в помещении вивария при температуре воздуха
20-22C?, влажности не более 50%, в стандартных пластиковых клетках (не более 6
особей в каждой), на стандартном рационе [60]. В ходе эксперимента оценивали
внешний вид животных, их активность, состояние шерсти, глаз.
В зависимости от возраста животные были разделены на три равные серии [104].
Первую серию составили неполовозрелые крысы с исходной массой 30-40 г. (в
возрасте 4 недель). Вторую серию составили половозрелые крысы с исходной массой
130-150 г. (в возрасте 4 месяцев). В третью серию вошли животные периода
старческих изменений с исходной массой 330-350 г. (в возрасте 18 месяцев).
Животных каждой серии подразделяли на 4 группы в зависимости от действующих на
них агентов (табл.2.1). Первую группу составили крысы, перенесшие тимэктомию.
Во вторую группу вошли животные, подвергшиеся операции ложной тимэктомии.
Крысы, которым внутрибрюшинно вводили циклоферон, составили третью группу.
Контрольные животные, получавшие физиологический раствор хлорида натрия –
четвертую группу. Крыс каждой группы распределяли на подгруппы в зависимости от
сроков наблюдения 7, 15, 30, 90 и 180 суток.
Тимэктомию у крыс производили хирургическим способом, под эфирным наркозом.
Крыс закрепляли на столике в положении на спине. Скальпелем для глазных
операций разрезали кожу и поверхностную фасцию от нижнего края перстневидного
хряща до средней трети грудины. По линии разреза тупо раздвигали мышцы шеи и
прямыми ножницами для глазных операций строго по средней линии рассекали
грудину. Разведя края раны, тупо отслаивали тимус от прилежащих сосудов и
сердца. Обе доли железы удаляли при помощи пинцета. Рану зашивали шелковыми
нитками. Поверхность разреза смазывали настойкой йода. Полноту удаления тимуса
контролировали макроскопически при вскрытии животных и с помощью
гистологического анализа клетчатки переднего средостения.
Животные второй группы подвергались ложной тимэктомии. При этом сохранялись все
этапы операции кроме удаления вилочковой железы.
Крысы третьей группы получали препарат, оказывающий иммуномодулирующее действие
(усиление сниженной активности иммунной системы и уменьшение неадекватно
высокого иммунного ответа). Был использован циклоферон производства НТФФ
«Полисан», Санкт-Петербург, 600703, представлящий собой низкомолекулярный
индуктор эндогенного интерферона, относящийся к классу производных
акридонуксусной кислоты. Композиционная формула препарата представляет собой
оригинальный комплекс двух интерфероногенов с разным механизмом действия:
акридонуксусная кислота + двуспиральная искусственная
РНК-полиинозиловая/полиуридиловая кислота. Известно, что циклоферон регулирует
антителообразование, естественные киллерные клетки, цитотоксические
Т-лимфоциты, оказывает противовоспалительное действие. В настоящее время
циклоферон широко применяется в клинической практике для нормализации реакций
клеточного и гуморального иммунитета, стимуляции процессов регенерации,
активизации синтеза эндогенного интерферона. Препарат вводился животным
ежедневно в утренние часы (в течение 10 дней), внутрибрюшинно в дозе 6мкг/кг
массы тела по схеме на 1,2,4,6,8,11,14,17,20,23 день [192]. Введение
циклоферона по данной схеме связано с тем, что он индуцирует ускоренный синтез
интерферона, максимум накопления которого в сыворотке крови отмечается уже
через 2 часа после индукции, однако синтез интерферона так же быстро
прекращается, и к 24 часам он почти полностью исчезает из кровотока.
Гипореактивная фаза в ответ на стимуляцию циклофероном длится двое суток [137].
Расчет дозировки вводимого лекарственного препарата осуществляли по формуле:
доза крысы = 3,62 ґ доза человека / 0,57. В данной формуле доза для человека
соответствует применяемой в клинической практике [139].
Животным четвертой группы вводили внутрибрюшинно эквивалентное по объему
количество физиологического раствора хлорида натрия по той же схеме.
По истечении сроков эксперимента эвтаназию животных осуществляли путем
декапитации под эфирным наркозом в соответствии с «Методическими рекомендациями
по выведению животных из эксперимента» (1985). Во время наркоза быстро
вскрывали брюшную полость и извлекали желудок. Выбор материала обусловлен тем,
что СОЖ чрезвычайно чувствительна к различным экзогенным и эндогенным
раздражителям, вызывающим ее структурную перестройку. Макроскопически оценивали
внешний вид органа, состояние слизистой оболочки, выраженность желудочных
складок. Для морфологического исследования материал брали из фундальной части
желудка и фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина при температуре
4°C. Проводку материала осуществляли по стандартной схеме путем обезвоживания в
спиртах возрастающей концентрации и удаления спирта с помощью ксилола. Образцы
заливали в парафин. Из полученных блоков на микротоме МС-2 изготавливали
серийные парафиновые срезы толщиной 4-5 мкм. Срезы окрашив
- Киев+380960830922