РОЗДІЛ 2
НАПРЯМКИ, МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ
Дисертаційна робота виконана впродовж 2000 - 2005 рр. в лабораторії вивчення хвороб рогатої худоби Національного наукового центру "Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини", а також у господарствах Полтавської і Харківської області.
Виходячи з поставленої мети та вирішення поставлених задач нами вибрано такі основні напрямки досліджень:
* теоретично, епізоотологічно та експериментально обґрунтувати комбіноване щеплення інактивованих вакцин проти бруцелаовісної та хламідійної інфекцій,
* розробити технологію виготовлення та випробувати на лабораторних тваринах і вівцях експериментальні серії інактивованої біемульсин-вакцини проти хламідійної і бруцелаовісної інфекцій.
Теоретичне обґрунтування комбінованого застосування щеплень проти хламідійної і бруцелаовісної інфекцій базується на даних літературних джерел та патентах щодо виготовлення комбінованих вакцин. Ми враховували те, що хламідії є облігатними внутрішньоклітинними бактеріями. Бруцели також мають особливість до внутрішньоклітинного паразитування, що позначається на механізмах патогенезу хвороби та імуногенезу. Захист від зараження зазначеними збудниками зумовлюється в першу чергу, активацією ефекторних макрофагів. Макрофаги, після зустрічі з антигенами одного внутрішньоклітинного збудника набувають гетерологічну активність також проти інших подібних збудників, що забезпечує "параспецифічний" імунітет [53, 54. 55].
Епізоотичне обґрунтування комбінованого щеплення проти хламідійної і бруцелаовісної інфекцій базується на даних наукових джерел, щодо широкого розповсюдження зазначених інфекцій серед вівцепоголів'я у різних країнах світу, зокрема в Україні [6, 7, 16, 85, 86, 87, 88, 89, 98, 100, 145, 200, 247]. Окрім зазначеного для обґрунтування актуальності та практичної доцільності розробки комбінованого щеплення проти бруцелаовісної і хламідійної інфекцій нами також використано результати епізоотологічного, серологічного, бактеріологічного досліджень на хламідіоз та ІЕ баранів в господарствах з низьким рівнем відтворення вівцепоголів'я в Полтавській та Харківській областях. Серологічні дослідження на інфекційний епідидиміт проводили в реакції імунодифузії (РІД) та реакції тривалого зв'язування комплементу (РТЗК), на хламідійну інфекцію в реакції зв'язування комплементу (РЗК) з використанням комерційних діагностичних наборів на бруцельоз РБП, РЗК.
Для виконання поставлених завдань в роботі використано:
* виготовлені нами за лабораторним регламентом експериментальні серії інактивованої емульсин-вакцини проти інфекційного епідидиміту баранів (Інститут експериментальної та клінічної ветеринарної медицини, УААН);
* інактивовану емульсин-вакцину "ЕВАК" проти інфекційного епідидиміту баранів ( Всеросійський інститут експериментальної ветеринарії);
* інактивовану емульсин-вакцину проти хламідійного аборту ВРХ, овець, кіз та свиней ТУ У 10.02.01.270.91 (Сумська державна біофабрика);
* вакцину проти хламідіозу ВРХ та ДРХ культуральну інактивовану (ООО "БЛИЦ");
* інактивовану культуральну емульсин-вакцину проти хламідіозу тварин (Всеросійський інститут експериментальної ветеринарії, Армавірська біофабрика);
* інактивовану вакцину проти хламідіозу овець з масляним ад'ювантом Phylaclam vakcina ad us.vet (inaktivelt, olayjal odjuvalt) (фірма Sanofi);
ад'юванти: Montanide ISA-70 (Франція), масляний ад'ювант "ФГУ ВНИИЗЖ" (Росія, ФГУ "Федеральний центр охорони здоров'я тварин"), штами збудника бруцелаовісної інфекції: B. оvis 67/Б, B. оvis 65939, B. оvis 65 - і, штами хламідій: Chlamydia рsittaci Зд 01. 10, Зд 10. 02, курячі ембріони 6-ти денного віку - 106 шт, лабораторні тварини: морські свинки - 248 гол., білі миші - 20 гол.), вівці 41 гол.
Для виготовлення інактивованої емульсин-вакцини проти інфекційного епідидиміту баранів або інактивованої біемульсин-вакцини проти хламідійної та бруцелаовісної інфекції використано вакцинний штам B. оvis 67/Б, що депонований в ДНКІБШМ № 219, патент № 51379 А. Штам Brucella оvis 67/Б - ізольований у 1972 році від барана в Болградській ГПС Одеської області зберігається в колекції мікроорганізмів ІЕКВМ. Дослідження протективних властивостей вакцин проведено шляхом зараження вірулентними штами B. оvis 65939 - референтний, який отримано з ВДНКІ у 1973 році та штам B. оvis 65 - і епізоотичний, виділений нами в 2000 році від барана. Культурально-біохімічні властивості штамів досліджували згідно методик, рекомендованих ФАО/ВОЗ (1986) та МЕБ (2004).
Морфологічні і тинкторіальні властивості культур B. оvis вивчали під імерсійною системою мікроскопу (? 90) у мазках, пофарбованих за методом Грама, Козловського. Стабільність штаму і характеристику однорідності колоній у популяції вивчали за допомогою стереоскопу МБС-2 на 3 - 4 добових агарових культурах, пофарбованих за Уайт-Вільсоном 0,05% розчином кристалвіолету протягом 30 секунд в чашках Петрі. Біологічні властивості визначали по таким показникам: продукція сірководню (H2S), ріст на щільних середовищах з основним фуксином (1:50000) або тіоніном (1:50000), аглютинація з 0,2 % розчином трипофлавіну, термоаглютинація суспензії бактерій у концентрації 2 ? 109 м.к./см3 при 90 0С впродовж 45 хвилин, облік результатів зразу, через одну годину і 24 години витримування при кімнатній температурі. Антигенні властивості досліджували в пластичній реакції аглютинації (РА) із S- та R- бруцельозними сироватками виробництва НВО "Ріверс" та ДП "Ветмедицина" за "Настановою по діагностиці бруцельозу тварин К., 1998". Постановку РА на скельцях з живими культурами проводили за загально прийнятою методикою з візуальним обліком при косому освітленні знизу від освітлювача ОІ-19 або під стереоскопічним мікроскопом МБС-2 із додержанням правил особистої безпеки.
Постановку РІД проводили за методикою згідно "Настанови по застосуванню набору компонентів для серологічної діагностики інфекційного епідидиміту баранів в реакції імунодифузії" 1996 з використання