ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Работа выполнялась в течение 1999-2003 гг. в Донецком региональном центре
охраны материнства и детства (ДРЦОМД), генеральный директор –
чл.-корр. АМН Украины, д.мед.н., проф. Чайка В.К.) и в отделении
восстановительной хирургии органов малого таза Института неотложной и
восстановительной хирургии (ИНВХ) им. В.К.Гусака.
Лабораторные исследования проводились в лаборатории иммунологических
исследований «Бакплан» на кафедре эпидемиологии Донецкого государственного
медицинского университета им. М.Горького (зав. лабораторией – доцент, к.мед.н.
Колесникова А.Г.), лабораториях ДРЦОМД и ИНВХ .
У значительной части женщин с гнойно-воспалительными заболеваниями гениталий
применение новейших антибактериальных препаратов не приводит к полному
прекращению инфекционного процесса. Это связано с трудностями создания в очаге
воспаления длительных терапевтических концентраций антибиотиков, из-за быстрого
метаболизма последних до попадания в очаг воспаления [70, 109, 110].
Вследствие длительного существования воспалительного процесса угнетается
иммунологическая реактивность организма, и нарушаются репаративные процессы
[43, 111, 112, 113].
Сформулированы следующие рабочие гипотезы:
– воспалительные заболевания гениталий на фоне вторичного иммунодефицита
приводят к длительному рецидивирующему течению с образованием тубоовариальных
опухолей и потере генеративной функции;
– новый (предлагаемый) алгоритм лечения оказывает более эффективное воздействие
на женщин с ГВЗ гениталий и возможностью проведения органосохраняющих
операций.
Научный метод лечения прошел 4 ступени развития: проведение наблюдений,
выделение (абстрагирование) значимых показателей как основы для изучения
гипотез, развитие гипотез с предсказанием новых результатов; сбор новых фактов,
которые верифицировали предсказания разработанных гипотез.
Для исследования гипотез на первом этапе было проведено обследование 88 женщин
репродуктивного возраста: 61 женщина с наличием ГВЗ гениталий в возрасте от 18
до 49 лет и 27 здоровых женщин фертильного возраста, которые проживают в
экологически неблагоприятной зоне (Донецкий регион).
Пациентки были разделены на группы: I группа – основная – 30 женщин с ГВЗ,
получавшие предложенную новую методику лечения с включением эндолимфальной
антибиотикотерапии и ИВТ; II группа – сравнения – 31 пациентка с ГВЗ,
получавшие базовую парентеральную антибиотикотерапию. В обеих группах по
показаниям проводилось оперативное лечение.
В основной группе в комплексную терапию была введена ИВТ, которая проводилась
аппаратом «ИВТ-Порог», сконструированным и зарегистрированным в Украине.
Отличительной особенностью устройств для ИВТ является сверхнизкий уровень
облучающего сигнала (среднее значение спектральной плотности мощности
10-19-10-21 Вт/(см2ЧГц)) в отличие от КВЧ (крайне высокие частоты) терапии, где
плотность потока мощности составляет
10-3–10-6 Вт/см2. Коренное отличие ИВТ от всех существующих средств современной
«медицины действия» на организм, состоит в том, что при таком слабом
воздействии мощности потока он «взаимодействует с организмом».
Исследовали гинекологический статус, изучали анамнез и жалобы больной,
проводили бимануальное исследование, ультразвуковое исследование (УЗИ) органов
малого таза, кольпоскопию, по показаниям - обзорную рентгенографию органов
малого таза для исключения или подтверждения перитонита.
Все больные были обследованы с помощью инструментальных и лабораторных методов:
проводился общий анализ крови и мочи, биохимический анализ крови, исследовались
показатели коагулограммы, состояние иммунной системы, посевы из цервикального
канала и очага воспаления во время оперативного вмешательства для определения
микрофлоры.
Иммунный статус оценивали по показателям:
– клеточного иммунитета и его субпопуляций: Т-клетки, Т-хелперы (СD4),
Т-супрессоры (CD8), СD4/CD8, CD16, В-клетки (CD22) в реакции прямой
иммунофлюоресценции (Ю.А.Гриневич, А.Н.Алферов,1981);
– гуморального иммунитета: иммуноглобулины (Ig) A, M, G методом радальной
иммунодиффузии (G.Mancini et al., 1965);
– фагоцитарной системы путем постановки классического фагоцитоза по методу
Коста Е.А. и Стенко М.И (1990);
– сенсибилизации к микробным антигенам (стрептококка, стафилококка) изучалась с
помощью реакции иммунолейколиза (РИЛ);
– циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в реакции с полиэтиленгликолем
(1981);
– фагоцитарной активности лейкоцитов (ФАЛ) в тесте с нитросиним тетразолем
(НСТ-тест) методом В.С.Нагаева, М.Г.Шубича, (1995);
– цитокинов: интерлейкинов- IL2, IL6; туморнекротический фактор (TNF), их
определяли с помощью метода моноклональных антител (ООО «Протеиновый контур»,
Санкт-Петербург);
– состояние системы неспецифической защиты изучали с помощью определения
концентрации лизоцима крови по Бухарину (1989) [114, 115, 116, 117].
Содержание лейкоцитов и дифференциальный подсчет лейкоцитарной формулы
осуществлялся унифицированным методом морфологического исследования форменных
элементов крови с приготовлением гематологического мазка.
Показатели экспрессии мононуклеарами крови молекул CD3, CD4, CD8, CD22, CD16
определяли с помощью соответствующих моноклональных антител фирмы «Ortho» в
реакции прямой иммунофлюоресценции (Ю.А.Гриневич, А.Н.Алферов,1981).
Лунки парафильма, прикрепленного на предметном стекле, заполнялись по 20 мкл
поли-L-лизином в концентрации 50 мкг/мл. Спустя 30 минут инкубации при 37°С в
лунки, отмытые дважды в среде 199, по 20 мкл вносилась исследуемая суспензия
клеток в концентрации 1Ч106/мл. Через 45 мин. инкубации (37°С) к осадку
лимфо
- Київ+380960830922