ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Экспериментальные исследования.
2.1.1. Способ моделирования катаракты.
Для исследования использовались кролики породы Шиншилла, половозрелые самцы,
весом от 1,9 до 2,5 кг, содержащиеся на стандартном рационе вивария. Всего было
использовано 109 животных.
Работа с экспериментальными животными проводилась в соответствии с
требованиями, изложенными в «Международных рекомендациях по проведению
медико-биологических исследований с экспериментальными животными»,
предложенными Советом международных медицинских организаций в 1985 году,
разработанным на их основании приложением к Приказу Министра Здравоохранения
СССР № 555 от 12.08.1987 г. « О мерах по дальнейшему совершенствованию форм
работы с использованием экспериментальных животных».
Животные были разделены на 4 экспериментальные группы: ? группа животных
подвергалась только световому воздействию (20 кроликов); 2 группа - воздействию
света + препарата «Факовит» (15 кроликов); 3 - животные, у которых
воспроизведение световой катаракты осуществлялось на фоне ксенобиотика
ацетаминофена (20 кроликов); у 4 группы животных катаракта моделировалась при
воздействии света + ксенобиотика + «Факовит» (19 кроликов). Контрольные группы:
а) интактные животные, не подвергавшиеся никаким воздействиям (20 кроликов); б)
животные, получавшие ксенобиотик без светового воздействия (15 кроликов).
Для воспроизведения экспериментальной катаракты нами была использована световая
модель, которая воспроизводилась следующим образом: животные помещались в
одноярусные клетки с решетчатыми стенками, расположенными вдоль стен квадратной
комнаты, стены которой были выкрашены в белый цвет, площадь комнаты 10 м2 . В
центре комнаты на высоте 110 – 120 см от пола, что соответствовало расстоянию
от пола Ѕ высоты клетки, размещалась лампа типа ДРВ-750, с помощью которой
производили облучение. Во время облучения положение животных в клетках было
естественным. Спектральный состав лампы максимально приближался к солнечному
свету и составлял: ультрафиолетовая область – 6,3 %, область видимого света –
47,5 %, инфракрасная область – 46,3 %, диапазон длин волн распространялся от
350 нм до 1150 нм, плотность светового потока составляла 30 мВт/см2. Таким
образом, кролики подвергались облучению светом высокой интенсивности, по
спектральному диапазону максимально приближенному к солнечному. Животные
облучались по 9 часов в сутки [30].
При воспроизведении световой катаракты на фоне применения препарата «Факовит»
животные этой экспериментальной группы на протяжении всего эксперимента помимо
9-часового светового облучения получали препарат во время еды (350 мг на кг
веса животного).
«Факовит» выпускается в виде таблеток, состоящих из действующих веществ:
кислота глутаминовая, глицин, пиридоксина гидрохлорид, L-цистеин, кислота
аскорбиновая.
1 таблетка желудочнорастворимая содержит: кислоты глутаминовой – 0,2 г, глицина
– 0,1 г, пиридоксина гидрохлорида – 0,025 г; 1 таблетка, покрытая оболочкой,
кишечнорастворимая содержит: L-цистеина – 0,2 г, кислоты аскорбиновой – 0,175
г.
Фармакотерапевтическая группа. Средство для регуляции метаболических процессов
в хрусталике, обладает антирадикальными и детоксикационными свойствами. В
хрусталике из глутаминовой кислоты, глицина и цистеина с участием АТФ
синтезируется трипептид глутатион, являющийся центральным звеном в
ферментативной системе антиоксидантной защиты белков и обезвреживания
токсических метаболитов. Транспорт указанных аминокислот в хрусталик через
капсулу происходит с участием фосфорилированной формы пиридоксина гидрохлорида
(пиридоксальфосфата). Аскорбиновая кислота выполняет роль регулятора
окислительно-восстановительных процессов в хрусталике; участвует в водородном
обмене, восстановлении дисульфидных связей.
Препарат угнетает свободнорадикальные процессы в хрусталике, благодаря чему
уменьшается образование сшивок и полимеризация его белков, что проявляется в
замедлении или приостановлении помутнения хрусталика.
«Факовит» выпускается ООО Фармацевтической компанией «Здоровье».
Такому же световому облучению подвергалась и третья группа кроликов, но
вдобавок перорально получала ксенобиотик – ацетаминофен: 50 мг на кг веса
животного.
Четвертая экспериментальная группа при тех же световых условиях получала как
ксенобиотик, так и «Факовит». Препараты применяли в указанных дозировках.
Эксперимент длился 40 недель.
В течение всего эксперимента хрусталики животных исследовали с помощью
биомикроскопии (щелевая лампа фирмы Карл Цейс). Перед осмотром зрачки расширяли
инстилляциями 1 – 2 капель 1-% раствора атропина. Осмотр проводили перед
началом и каждые две недели на протяжении всего эксперимента.
Развитие нарушений оптических свойств хрусталика в различные периоды светового
воздействия представлены на фотографиях (рис. 2.1 - рис. 2.4).
При оценке изменений в хрусталиках экспериментальных животных было выделено 5
стадий:
0 – прозрачный хрусталик, отсутствие субкапсулярных вакуолей, задний шов узкий
с четкими границами.
1 стадия – наличие единичных или множественных, мелких заднекапсулярных
вакуолей, отсутствие изменений в других зонах хрусталика.
2 стадия – наличие множественных мелких вакуолей преимущественно в
заднекапсулярных слоях хрусталика и других его зонах, контурирование заднего
шва.
3 стадия – множественные разнокалиберные вакуоли в заднекапсулярных слоях и
появление единичных, крупных вакуолей в других слоях хрусталика, наличие или
отсутствие мелких точечных помутнений в области заднего шва.
4 стадия – множественные разнокалиберные вакуол
- Київ+380960830922