Ви є тут

Роль кальцієвих каналів у функціонуванні нервових та нейроендокринних клітин в нормі та патології

Автор: 
Лук\"янець Олена Олександрівна
Тип роботи: 
Дис. докт. наук
Рік: 
2006
Артикул:
0506U000147
129 грн
Додати в кошик

Вміст

РОЗДІЛ 2. МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ
2.1. Об'єкт дослідження
2.1.1. Хромафінні клітини
2.1.1.1. Загальна характеристика хромафінних клітин наднирникової залози
По своєму походженню секреторні клітини мозкової речовини наднирників
аналогічні постгангліонарним нейронам симпатичної нервової системи; не дивно
тому, що і функціонують вони аналогічно. Вегетативна (автономна) нервова
система включає в себе парасимпатичну систему з холінергетичнми пре- і
постганглінарними нервами, симпатичну нервову систему з холінергічними
прегангліонарними і адренергічними постгангліонарними нервами і мозковий шар
наднирників. Останній, по суті справи, є продовженням симпатичної нервової
системи, оскільки прегангліонарні волокна черевного нерву закінчуються на
хромафінних клітинах мозкового шару наднирників, продукуючих катехоламіни
-норадреналін, адреналін. Значить, мозковий шар наднирників представляє собою
спеціалізований ганглій без продовження у вигляді аксонів. Хромафінні клітини
цього шару синтезують, запасають і секретують продукти, дія яких здійснюється
на віддалі від місця їх синтезу. Таким чином, мозковий шар здійснює функцію і
ендокринного органу - чудовий приклад взаємодії нервової і ендокринної системи
[166].
Гормони симпатоадреналової системи є життєво необхідними, їх роль в організмі
надзвичайно велика: саме вони забезпечують адаптацію до гострих і хронічних
стресів. Адреналін і норадреналін - основні елементи реакції "боротьби і
втечі". Відповідь на викликаний при цьому переляк включає в себе швидку
інтегровану перебудову багатьох складних процесів в органах, що безпосередньо
приймають участь в даній реакції (мозок, м'язи, серцево-легенева система і
печінка) [796].
Катехоламіни самі по собі не стимулюють реакції "боротьби і втечі", але
включаються у відповідь разом з глюкокортикоїдами, вазопресином, ангіотензином,
глюкогоном і соматотропіном. Катехоламінові гормони представляють собою
3-,4-дигідроксипохідні фенилетиламіну. Вони синтезуються в хромафінних клітинах
мозкового шару наднирників. Свою назву ці клітини отримали тому, що містять
гранули, що забарвлюються під дією біхромату калію в червоно-рудий колір.
Головний продукт мозкового шару наднирників - адреналін. На долю цієї сполуки
припадає близько 80% усіх катехоламінів мозкового шару. Поза мозкової речовини
адреналін не утворюється.
В мозковому шарі наднирників містяться хромафінні гранули - органели, що здатні
до біосинтезу, поглинання, запасання і секреції катехоламінів. Окрім останніх,
в склад цих гранул входять ряд інших речовин, в тому числі АТФ-Mg2+, ДБГ, Ca2+
і білок хромогранін А. Катехоалміни потрапляють в гранули з допомогою АТФ -
залежного механізму транспорту і зв'язуються з нуклеотидом в співвідношенні 4/1
. Норадреналін запасається в цих гранулах, але може виходити з них і
метилуватися; утворений в результаті адреналін включається в нову популяцію
гранул [796].
Катехоламіни і АТФ вивільнюються в тому ж співвідношенні, в якому вони існують
в гранулах.м Це відноситься і до інших компонент, включаючи ДБГ, кальцій і
хромогранін А. Гормони, які зв'язуються з в1-в2- рецепторами, активують
аденілатциклазу, тоді як гормони, асоційовані з б2-рецепторами, інгібують її.
Зв'язування катехоламінів індукує конденсування рецепторів з G-білком, який
потім зв'язується з GTP. Це або стимулює (Gs), або інгібує GJ) аденілатциклазу,
що в результаті призводить до підсилення чи подавлення синтезу сАМР. Реакція
виключається, коли GTP-аза, зв'язана з б-субодиницьою G-білка, гідролізує GTP.
б1-рецептори беруть участь в процесах, які призводять до зміни
внутрішньоклітинної концентрації кальцію чи до зміни метаболізму
фосфатиділінозітиду. Не виключено, що для цієї реакції необхідний особливий
G-білковий комплекс [747].
Нервова стимуляція мозкового шару наднирників приводить до злиття хромафінних
гранул з плазматичною мембраною і, таким чином, обумовлює вивільнення
норадреналіну і адреналіну шляхом екзоцитозу. Цей процес залежить від кальцію,
і подібно іншим процесам екзоцитозу стимулюється холінергічними і
в-адренергічними агентами і інгібується б-адренергічними агентами [600].
2.1.1.2. Виділення окремих хромафінних клітин
Експерименти, описані в даній роботі, проводились на свіжоізольованих
хромафінних клітинах наднирників статевозрілих щурів. Нами використовувались
дорослі (5-6 місяців) самки білих щурів лінії Вістар масою 180-230 грамів, що
утримувались на стандартній лабораторній дієті у віварії Інституту фізіології
Ім. 0.0. Богомольця НАН України. Вибір віку визначався повною фізіологічною
зрілістю тварини та в зв'язку з цим величиною та сформованістю її наднирника. У
дорослої тварини його розміри складають приблизно Зё5мм. Для отримання
свіжоізольованих клітин використовувалась стандартна процедура ферментативної
ізоляції. Щура анестезували за допомогою ефіру у спеціальному ексикаторі. Через
10-15 хвилин, коли тварина знаходилась у стадії глибокого сну, її декапітували
і проводили операцію по виділенню наднирників. Хірургічними ножицями робився
Т-подібний розріз черевини і видаляли обидва наднирники. Виділені наднирники
промивалися у розчині DPBS. Далі за допомогою тонкої голки через устя вени
наднирник промивався стандартним розчином DPBS (9.6гр/літр), що містив фермент
колагеназу тип ІА (Sigma, США) в концентрації 0.5мг/мл. для видалення крові, що
залишилась в тканині. Ферментативну обробку тканини проводили в цьому ж розчині
на протязі 30ч50 хвилин при 37°С. Потім під бінокуляром на фільтрувальному
папері в чашці Петрі, за допомогою хірургічного леза виділялась більш темна за
кольором медулярна частина наднирника, яка розді