РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Исследования проводили в 1992-1997 годах в кормовых и опытных плантациях четырех хозяйств, расположенных в различных климатических зоных Украины - в Велико-Лепетихском шелководческом хозяйстве Херсонской области (южная Степь), Пологском шелководческом хозяйстве Запорожской области (центральная Степь), Институте шелководства УААН Харьковской области (юго-восточная Лесостепь) и Хмельникском шелководческом хозяйстве Винницкой области (юго-западная Лесостепь).
С целью выявления регистрации очагов поражения шелковицы вилтом, отбора в них вилтоустойчивых форм, проводили маршрутные обследования кормових плантаций Украины 153.
При обследовании кормовых плантаций шелковицы учитывали, в зависимости от площади, следующее количество растений:
* на площади от 1 до 3 га - пять рядов;
* на площади от 3 до 10 га - десять рядов;
* на площади более 10 га - пятнадцать рядов.
В каждом из учетных рядов отсчитывали подряд 1000 посадочных мест, где определяли количество живых, пораженных возбудителями болезней (из них вилтом) и погибших растений. В процессе обследования учитывали общую площадь насаждений и сортовую принадлежность.
Распространенность заболевания определяли по процентному отношению пораженных растений к общему количеству учетных растений.
Степень поражения определяли в процентах по каждому учетному растению, а затем рассчитывали в целом по сорту (Методика Государственного сортоиспытания сельскохозяйственных культур) 153.
В вышеназванных хозяйствах проводили обследования маточно-семенных плантаций шелковицы, заложенных в 1982 - 1987 годах стандартными районированными сортовыми саженцами, по схеме посадки 55 м.
Обследование распространения заболевания проводили в школах саженцев, селекционного и коллекционного питомников путем сплошного осмотра фактически существующего количества растений.
Описание растений в очагах поражения вилтом проводили по методу визуальной оценки 49; 142, согласно которому степень поражения шелковицы вилтом оценивали по четырехбальной шкале 38:
1 балл - усыхание единичных побегов, слабо заметно усыхание листьев отдельных побегов или всей кроны;
2 балла - усыхание большей части скелетных побегов, наличие в области корневой шейки вдавленностей и растрескиваний коры;
3 балла - растение погибло, но появляется поросль, на штамбе в области корневой шейки наблюдается растрескивание, образуются раковины;
4 балла - полная гибель растения.
Определение степени устойчивости сортов шелковицы в лабораторных условиях проводили методом обратного титрования экзоосмированных из клеток органических веществ 110.
Суть метода сводится к следующему: из третьего - четвертого (считая от верхушечного) листа однолетнего побега, в период середины июля по средину августа (период накопления листовой массы), берут листовые высечки (диски диаметром 1 см) общей массой в 1 г, помещают в сосуд и заливают 10 мл дистиллированной воды и настаивают в течение 24 часов. Затем к 5 мл полученного настоя добавляют 10 мл серной кислоты, разведенной 1:6 (катализатор) и 5 мл 0,05Н раствора марганцево-кислого калия. Смесь подогревают до 80 С в течение одной минуты и титруют 0,05Н раствором щавелевой кислоты до обесцвечивания. По объему щавелевой кислоты, израсходованной на титрование, вычисляют количество органических веществ, экзоосмированных из клеток (мг/г сухой массы листьев).
По этому показателю определяют степень устойчивости шелковицы к вилту:
устойчивая - 0,11 - 0,39 мг/г;
слабоустойчивая - 0,40 - 0,69 мг/г;
восприимчивая - 0,70 - 1,00 мг/г и выше.
Выделение фитопатогенных грибов проводили из средних почвенных образцов, отбираемых стерильным ножом в ризосфере на глубине 20 - 30 см и у корневой шейки визуально здоровых и пораженных вилтом растений шелковицы, предварительно сняв верхний слой почвы. Средние образцы почвы составляли смешиванием семи индивидуальных проб весом 100-200 г каждая 143.
Выделение почвенных грибов проводили методом посева почвенных суспензий на агаровые питательные среды 55; 65; 144.
При микроскопировании грибов из рода Fusаrium использовали специальный фиксатор-спирт ректификат, глицерин 55. Для лучшей видимости контура конидий и перегородок к фиксатору добавляли краситель (метиленовый синий) - 0,5 мл на 100 мл фиксатора.
Частоту встречаемости видов определяли по формуле 143:
А=ВС100%
где А - частота встречаемости;
В - число образцов, в которых данный вид обнаружен;
С - общее число проанализированных образцов.
Выделение грибов из пораженных растений и определение видового состава проводили по Методическим указаниям ВИЗРа 146.
Для определения видового состава возбудителей вилта три раза в течение вегетационного периода отбирали образцы пораженных растений по 15 штук с плантаций посадки 1987, 1990 и 1995 годов.
Первые образцы отбирали после массового распускания листьев: в период с 6 июня по 8 августа 1994 года, второй раз - в период с 12 июля по 5 августа 1995 года, третий раз - с 4 июня по 5 августа 1996 года.
Растения выкапывали и вырезали нижнюю его часть в зоне корневой шейки (длиной примерно 10 см). После промывки и просушивания образцов с каждого из них брали по 5 проб коры с древесиной.
Техника взятия проб сводилась к следующему: на образце в месте свежего поражения кору и древесину протирали спиртом, наружный ее слой срезывали стерильным скальпелем с мест, где начинала изменяться окраска коры. Пробу вырезали, захватывая слой древесины в 1-2 см и размещали в чашках Петри на сусловый агар.
Чашки Петри помещали в термостат с температурой 22,5С. Как только мицелий грибов из срезов переходил на питательный субстрат, его стерильной иглой переносили на чистый сусловый агар в другую чашку Петри. Затем каждую пробу просматривали под микроскопом на малом увеличении, подсчитывая аналогичные колонии и определяли видовой состав возбудителей вилта по определителю грибных болезней [147].
Культурально-морфологические особенности выделенных изолятов возбудитенлей вилта изучали на сусловом агаре [55].
- Киев+380960830922