з
I ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Настоящая диссертационная работа, представленная в виде научного доклада, является итогом двадцатнлетних исследований, выполненных в соответствии с Государственным планом по решению научно-технической проблемы 0.69.05 "Лейкозы человека, животных и птиц" и аланом научно-исследовательских работ Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина "Разработать новые методы ранней дифференциальной диагностики и иммунопрофилактики гемобластозов с.-х. животных" (1976-1996 гг.).
Актуальность проблемы.
Среди болезней сельскохозяйственных животных, характеризующихся злокачественным ростом, гемобласгозы занимают первое место о частоте и тяжести заболевания. Рост заболеваемости гемобластозами человека и животных, отсутствие эффективных мер профилактики, ранней диагностики и лечения явились основой возникновения и постановки научной проблемы, решение которой актуально не только для медицины и ветеринарии, но имеет общебиологическое и народнохозяйственное значение.
Последние два десятилетня многочисленные исследования были направлены на изучение биологических особенностей лейкозной клетки, факторов лейкозогеиеза, иммунологических и биохимических аспектов лейкозного процесса, выяснение роли онкорнавирусов в механизме возникновения лейкозов с.-х. животных.
Применение современных молекулярно-биологических методов исследования позволило получить новые данные о лейкозогенезе, установить вирусную природу лейкоза крупного рогатого скота, изолировать этиологический агент - онкорнавирус типа С, изучить его строение, ультраструктуру и разработать чувствительные методы диагностики (Miller Y. et al., 1969; Calafat Y. et al.,1974, Broeke A. et al, 1990; I.assauret М., 1991; Di Jacomo R., 1992; Wittman W., 1993, Kelly E. et al, 1993, Reichert M., 1996, Cordas L. et al, 1997, Кукайн P.A. и соавт., 1973, 1982; ПягмЬянппич M.И. и соавт.. 1974: Надточей Г.В.. Валихов А.Ф., 1972;
Н. и со-что лей-гворные шие ви-литера-ым, но 1 (Jonda ia В.Е. и Р., Пав-дования еза.
Зі
at
КС
KJ
PJ
Т)
ж
IV!
сс
л<
п<
КНИГА ИМЕЕТ
4
В связи с накоплением новых сведений об особенностях лсйкозных клеток, их пролиферации, диффсрснцировки, ультраструктуры и иммуноцитохимии, на новом этапе развития науки продолжает обсуждаться вопрос, что же собой представляет лейкозная клетка, каков механизм ее возникновения и в чем главное ее отличие от нормальной кроветворной клетки (Rein Mard, 1983; Ristan E., 1988; Jsida T., 1994, Horvath M., 1996, Watanabe K. ct al, 1997, Кавецкнй P.E., Бутенко 3.A., 1984; Лспков C.B., 1996; Салогуб Г.Н., 1997).
К настоящему моменту четко установлено, что BLV и ретровирус типа С, вызывающий Т-клегочный лейкоз (лимфома) человека - HTLV, не имеют в своем геноме ни онко- ни лейкогеиа. Поэтому остается окончательно невыясненным механизм взаимодействия онкорнавирусов типа С с клетками-мишенями, лимфоцитами гсмопоэтической системы и их дальнейшая опухолевая трансформация.
Относительно вируса лейкоза крупного рогатого скота, можн-сказать, что первоначально он вызывает лишь онкорнавирусную инфекцию. Сейчас накопились убедительные данные о том, что 60-79 % животных становятся серопозитивными после инфицирования, но у них не развивается ни лимфоцитоз, ни лнмфосаркома. У части животных возникает персистирующий лимфоцитоз, после которого не возникают опухоли (доброкачественная пролиферация В-лимфоцитов) и лишь у некоторых животных развиваются гемобластозы. По мнению Mussday М. (1989), Evermann I, Di Jacomo R. (1993), Wang C., Onuma M. (1995) исход онковирусной инфекции в организме восприимчивых животных зависит от: 1) генетических факторов; 2) возраста животных во время инфицирования; 3) дозы вируса и его особенностей; 4) состояния стресса.
Большим достижением в лейкозологии является выявление этиологического фактора при Т-клеточном лейкозе (лимфоме) человека -ретровируса типа С, имеющего большое сходство с BLV. В этой связи изучение этнологии и патогенеза лейкозов крупного рогатого скота имеет общебиологическое значение в свете решения вопроса о потенциальном использовании лейкозов крупного рогатого скота как модели для изучения лейкемогенеза и вирусного канцерогенеза человека. Таким образом, к настоящему моменту, несмотря на новую молекулярно-генетическую информацию, представляется установленным лишь тс что в основе некоторых злокачественных лимфопролиферативных болезней лежит поражение кроветворных клеток лимфоидного ростка, ос-таегся неясным механизм их лейкозной трансформации, переход от нормальных клеток в опухолевые на различных этапах лейкемогенеза.
Решение некоторых аспектов этих задач возможно с помощью электронной микроскопии, путем выявления возможных ультраструк-турных критериев для оценки нормальных и лсйкозных клеток. Крайне важным является поиск морфологических маркеров малигнизирован-ных клеток. Наиболее общие характерные особенности в субмикроско-
17
новления лейкозного процесса. Указанные моменты прослежены на больных гемобластозами животных.
Хронический лимфоидный лейкоз (ХЛЛ).
Эго наиболее часто встречающаяся форма лейкоза у крупного рогатого скота в возрасте 4-8 лет. Хронический лимфолейкоз наблюдали у 45 коров, из которых 20 имели начальную стадию, 15 - развернутую и 10 - терминальную стадии болезни. Количество лейкоцитов в 1 мкл крови колебалось от 12 тысЛмкл до 365 тыс./мкл и более при наличии в лейко-формуле 7-14% пролимфоцитов, а в терминальной стадии - до 50% лимфобластов, недифференцированных и атипичных клеток.
Начальная стадия лимфолейкоза характеризуется наличием в пе-рифери-чеекой крови в основном малых и средних лимфоцитов иногда обнаруживали единичные пролимфоциты и лимфобласты. Ультраструктура преобладающего числа клеток не имела существенных отлл-ий от таковых у здоровых животных. Поверхность лимфоцитов преимущественно гладкая или с небольшим числом выступов. Клетки с высоким ядерно-цитоплазматическим отношением. Ядро расположено эксцентрично. В цитоплазме концентрируются органеллы с измененной ультраструктурой. Митохондрии (3-10 на клетку) часто имеют набухшие, деградированные или полностью редуцированные кристы. Часто встречается комплекс Гольджи и центриоли. У единичных клеток находили длинные профили эндоплазматического ретихулума. Цитоплазма богата рибосомами и полисомами. Ядрышко преимущественно большое, рыхлое. Постоянно наблюдали лимфоидные клетки с полиморфизмом ядер, наличием ядерных карманов (в среднем у 8,1 ± 1,6 % клеток) простой пузырьковидной формы. В отдельных лимфоцитах наблюдали 1-3 ядерных кармана.(Табл. 4)
Развернутая и терминальная стадии ХЛЛ. В отличие от начальной в развернутой и терминальной стадиях ХЛЛ наряду с увеличением общего числа лейкоцитов и лимфоцитов (30,0 тыс/мкл - 365,6 тыс./мкл), значительно увеличивается количество незрелых лимфоидных клеток (до 50%), лимфобластов и недифференцированных (до 5%), ридеровских форм клеток. Среди всех обнаруженных чипов клеток увеличилось число лимфоидных клеток с выраженными изменениями субмикроскопиче-ского строения важнейших клеточных органелл. Для лейкозных лейкоцитов были характерны прогрессирующие изменения в цитоплазматических органеллах. Как в малых, так и незрелых, недифференцированных клетках и бласгах находили центриоли, пнноцитозные пузырьки и аппарат Гольджи, который нередко был гипертрофирован, состоял из больших везикул и канальцев. В одной клетке находили 2-4 пластинчатых комплекса. Характерные аномалии обнаруживали в митохондриях. Наряду' с типичными митохондриями в одной и той же клетке наблюдали гигантские формы с обычной структурой или выраженной диском-плексацией и деструкцией крист. В митохондриях часто встречались мнелиноподобные структуры, образованные из мембран крист или
Рис. №1 Ультраструктурныс изменения в лимфоцитах при онкорнавирусной инфекции и хроническом лимфолейкозе: а,6 - ядерные карманы; в -миелиноподобные структуры; г - полиморфизм митохондрий. х8000
- Київ+380960830922