Полимеразная цепная реакция и иммуноферментный анализ в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота

2
ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение 4
I. Обзор литературы 7
1.1 Биохимическая структура микобактериальной клетки 7
1.2 Иммунитет при туберкулезе 12
1.3.Методы диагностики туберкулеза крупного рогатого скота 13
1.3.1 Эпизоотологическис данные 14
1.3.2 Клинический метод 14
1.3.3 Аллергический метод 15
1.3.4 Патолгоанатомический и гистологический методы 17
1.3.5 Бактериоскопический метод 18
1.3.6 Бактериологический метод 19
1.3.7 Биологический метод ' 21
1.3.8 Серологическая диагностика 22
1.4 Иммуноферментный анализ ? " ; ; 24
. .5 Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота иммуноферментным 27
методом
.6 Полимеразная цепная реакция 29
.7 Полимеразная цепная реакция в диагностике туберкулеза 31
I. Материалы и методы исследований 33
1.1 Материалы 33
1.2 Методы исследования 38
>. Результаты собственных исследований 49
-.2 Оценка методов выделения ДНК М.bovis и проведение амплификации 49
•азличными тест-системами. Определение чувствительности полимеразной 1епной реакции. Определение специфичности полимеразной цепной реакции.
.2.1 Оценка методов выделения ДНК М.bovis и проведение амплификации 50
•азличными тест-системами.
.2.1.1 Оценка метода выделения ДНК М.bovis и проведения амплификации 50
огласно инструкции тест-системы «МТБ-сош» ЦНИИ эпидемиологии.
.2.1.2 Оценка метода выделения ДНК M.bovis и проведения амплификации 51
огласно инструкции тест-системы НПО «Нарвак».
.2.1.3 Оценка метода выделения ДНК M.bovis согласно инструкции набора 51
еагентов «Фаст-преп» ООО НПБО «ё» (г. Пущино, Московская область, Вл. Баранов) и проведение амплификации согласно инструкции тест-системы ШО «Нарвак».
.2.2 Определение чувствительности полимеразной цепной реакции. 52
.2.3 Определение специфичности полимеразной цепной реакции. 53
.1 Результаты комплексного исследования на туберкулез крупного рогатого 53
кота в хозяйствах республики Татарстан. (РТ)
. Обсуждение результатов 90
выводы 113
фактические предложения 113
Гписок литературы 114
г 12
славливает способность микобактерий склеиваться в виде жгутов (105; 150; 57)
1.2 Иммунитет при туберкулезе
Первоначальные экспериментальные данные, с которых берет свое начало изучение противотуберкулезного иммунитета, относится к 1882 г., когда Р. Кох установил, что у зараженных микобактериями туберкулеза морских свинок наблюдается устойчивость к повторному заражению той же дозой.
Иммунитет к туберкулезу у животных складывается из двух факторов: из естественной резистетности и специфического иммунитета. Последний имеет черты нестерильного, зависящего от наличия в организме остаточного инфекта. Следовательно, подобный относительный иммунитет фактически существует, пока в организме находятся живые туберкулезные микобактерии.
Наиболее глубоко при туберкулезе изучен клеточный иммунитет. В настоящее время высказано предположение о механизме регулирующего влияния клеток - эффекторов клеточного иммунитета на взаимодействие макрофагов с микобактериями.
Опытным путем установлено, что Т - лимфоциты и синтезируемые ими медиаторы усиливают фагоцитарную активность макрофагов (захват микобактерий, окислительные процессы в макрофагах). Предполагается, что активированные макрофаги не только более эффективно захватывают микобактерии, но и ингибируют их размножение( 1; 28; 209; 63).
Менее ясна роль гуморального иммунитета в сопротивляемости организма животных к туберкулезной инфекции.
Самые различные антитела (антиполисахаридные, антилипид-ные,антипротеиновые) обнаруживали к микобактериальным антигенам, используя практически любые серологические реакции: РСК, РИГА, РДП, флуоресценцию, ИФА и др.(128; 204)
Однако уровень образования антител не является показателем напряженности иммунитета.
Исследованиями Каплина H.H., Головачевой 41, Grange J.M. и др. 147 установлено, что преобладание того или иного типа антител при туберкулезном процессе определяется многими факторами (природа и доза антигена, характер иммунизации, вид животного), причем, соотношение антител изменяется и в динамике заболевания, свидельствуя об их функциональной неоднозначности.
На наличие специфических антител указывает и то, что в крови у больных туберкулезные антигены находятся в составе иммунных комплексов, обеспечивая как специфическую защиту организма, так и различные аллергические процессы (3; 147; 182).
В последние годы ряд исследователей подтверждают взаимосвязь различных проявлений иммунитета (гуморального, клеточного) и указывают на то, что антитела играют регулирующую роль в клеточном иммунитете, в запуске и реализации процессов клеточной кооперации(2; 34; 206).
Вместе с тем следует отметить, что для того чтобы иметь ясное представление об иммунологических сдвигах в сенсибилизированных микобактериями туберкулеза макроорганизмах, а также для проведения дифференциальной иммунодиагностики этого заболевания, настоятельно требуются очищенные и специфические препараты микобактериальных антигенов.
1.3 Методы диагностики туберкулеза крупного рогатого скота
Своевременное выявление и удаление из стада больных животных является одним из основных мероприятий при оздоровлении неблагополучных по туберкулезу хозяйств. Постановка диагноза иногда бывает сложной и представляет большие трудности, особенно в хозяйстве, ранее благополучном по туберкулезу. В ветеринарной практике диагноз на туберкулез ставят комплексным методом на основе анализа эпизоотических данных, клинических