Иммунохимическое определение пропердина у крупного рогатого скота

4
ь
5
9
14
25
28
32
32
48
48
62
69
70
74
75
77
79
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ ...........................................
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.....................................
Значение системы комплемента в противомикробной защите организма ..................................................
Механизмы активации комплемента ....................
Белки пропердиновой системы организма. механизм участия проперди-на в активации альтернативного пути комплемента ....................................
Методы определения пропердина........................
Методы выделения пропердина..........................
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ............................................
Материалы и методы...................................
Результаты исследований .............................
Получение чистого препарата пропердина крупного рогатого скота .....................
Приготовление специфической анти-пропердиновой сыворотки .............................
Шизикохимические и функциональные
свойства препаратов пропердина
крупного рогатого скота .............................
Электрофоретическая подвижность и
молекулярная масса пропердиновых
фракций .............................................
Антигенные свойства препаратов пропердина
Антикомплиментарная и гемолитическая активности пропердина крупного рогатого скота
Влияние температуры на гемолитические свойства пропердина .............................
Влияние пропердиновых фракций на гемолитическую активность сыворотки крови крупного рогатого скота, дефицитной по некоторым факторам системы комплемента .........................................
2.2.3.6. Влияние пропердина взрослых животных крупного рогатого скота на активность классического и альтернативного путей активации комплемента сыворотки, крови новорожденных телят ........................................... 82
2.2.4. Отработка метода иммунохимического опре-
деления пропердина в молозиве коров ив
сыворотке крови ....................................... 85
2.2.5. Определение содержания пропердина в молозиве коров по дням лактации 89
2.2.6. Определение содержания пропердина в сы-
воротке крови телят и взрослых животных іфупного рогатого скота.
Корреляционный анализ зимозанового и иммунохимического методов определения пропердина ............................................... 92
3. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ИССЛЕДОВАНИЙ .......................................... 92
4. ВЫВОДЫ ................................................112
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ ............................. ИЗ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ..................................... 114
7. ПРИЛОЖЕНИЕ ........................................... 138
15.
разом является субъединецей связанной СЗ-азы АП - СЗвВв (196).
3. Выполняет роль рецептора для Р (36).
4. Взаимодействует с Н, приводя к блокированию связывающего локуса компонента В или к диссоциации Вв из СЗ/С5-азы (56; 158, 170), а такие к адаптации СЗв к действию I (160, 200).
5. СЗв-фрагмент способен дифференцировать активаторы АП, вступая во взаимодействие с Н или избегая его (148, 159).
Фактор В - это полиморфная серин-протеиназа, термо-
лабильный, одноцепочечный 5,9s в -глобулин с молекулярной массой 93000 дальтон у человека (62, 102, 115) и 95000 дальтон у крупного рогатого скота (185). В активируется путем ферментативного расщепления на два фрагмента: Ва и Вв (78, 95, 101, 167, 186).
Ва освобождается во время реакции, а Вв-фрагмент, несущий активный локус, остается в комплексе с СЗв, формируя СЗ-азу АП. Вв мокет действовать на свой субстрат только находясь в комплексе с СЗв (58, 186).
Фактор Д - это серин-эстераза, состоящая из одной
полипептидной цепи с молекулярной массой 24000 дальтон (52, 59,
68, 72, 99 ^ движется какх-глобулин в сыворотке крови, но как ß -глобулин после его выделения и очистки (118,165). Считается, что компонент Д находится в сыворотке крови в активированном состоянии (127). Исследования Козлова Д.В., Солякова Л.С., (16) learon d. (89) доказывают существование зимогенной его формы. Однако неизвестно, как она превращается в активную форму. Фактор Д катализирует образование СЗ и С5-конвертаз АП посредством расщепления
фактора В, связанного с СЗв, на Ва и Вв (190). Таким образом,
участие фактора Д в активации АП комплемента абсолютно необходимо (67, 90, 121).
16.
Фактор І (СЗв-инактиватор) - это гликопротеин, молекулярной массой 93.000 дальтон, состоящий из двух полипептидных цепей, соединенных дисульфидными мостиками (160).
Как было продемонстрировано в щелочном диск-электрофорезе и изоэлектрофокусировании, СЗв-инактиватор является высокогетерогенным белком (82, 125).
Whaley Н. С СОТр. (201), Whaley Н.К Tompson R.(203) предполагают, что СЗв-инактиватор - это фермент, а £IH (или Н) - его ко фактор. Однако не существует определенных доказательств того, что воздействие I на СЗв в отсутствии Н привело бы к протеоли-зу СЗв. Очищенный I может взаимодействовать с фиксированным на клетке СЗв в отсутствие Н и блокировать участие СЗв в образовании С5-азы классического цуги и СЗ/С5-азы АП (66, 174, 200 , 202).
Иммунное прилипание (связывание СЗв фиксированных частиц с СЗв рецепторами) также ингибируется I (73, 200).
У людей описан врожденный дефицит СЗв-инактиватора, приводящий к бесконтрольному запуску АП (71, 193).
Фактор Н (він ) - гликопротеин, состоящий из одной полипептидной цепи с молекулярной массой 150.000 дальтон. Н содержит 4,3$ (от молекулярной массы ) сиаловых кислот, при лишении которых он обладает активностью на 40$ выше обычного (168).
Н стехиометрически связывается с СЗв (56, 158) и осуществляет контроль АП. После образования комплекса Н с СЗв, Р и В не могут взаимодействовать с СЗв, в результате чего ингибируется образование СЗ/С5-азы - СЗвВв и СЗвВвР (56). Кроме того Н, связываясь с СЗв, вытесняет Вв из ферментативных комплексов и делает СЗв чувствительным к воздействию I (57). Инактивация связанного СЗв происходит и без Н, но в 30 раз медленнее (73, 160, 203). Удаление Н