Содержание
2
стр.
Введение.............................................................. 4
Обзор литературы...................................................... 7
Глава 1. Токсигенные грибы рода Fusarium.............................. 7
1.1 Методология изучения популяций.................................... 8
1.2 Современные подходы к систематике................................. 9
I
Глава 2. Фузариотоксины трихотеценового ряда.......................... 12
2.1 Строение и биологическая активность............................... 12
2.2 Методы анализа культур грибов..................................... 16
Глава 3. Характеристика гриба Fusarium роае........................... 17
3.1 Биологические особенности......................................... 17
3.2 1 Гричастность к фузариотоксикозам................................ 18
3.3 Токсичные метаболиты.............................................. 19
Собственные исследования.............................................. 24
Глава 4. Материалы и методы........................................... 24
(
4.1 Объекты исследования.............................................. 24
4.2 Условия культивирования грибов.................................... 27
4.3 Анализ культур на содержание фузариотоксинов...................... 28
4.4 Синтез белковых конъюгатов диацетоксисцирпенола................... 29
4.5 Индукция антител и их характеристика.............................. 31
Глава 5. Результаты исследований...................................... 34
5.1 Разработка ИФА диацетоксисцирпенола............................... 34
5.1.1 Получение и тестирование иммунореагентов........................ 34
5.1.2 Оптимизация условий анализа..................................... 41
I
5.2 Токсигенный потенциал региональных популяций Fusarium роае .. 45
5.2.1 Диацстоксисцирпенол и Т-2 токсин................................ 45
5.2.2 Ниваленол и фузаренон X......................................... 50
5.2.3 Зеараленон...................................................... 55
3
5.3 Видовые особенности биосинтеза трихотец-9-енов................ 57
5.3.1 Р.роае и другие распространенные возбудители фузариоза.......57
5.3.2 Локализованные и редко встречающиеся виды....................59
Обсуждение результатов исследований................................62
Выводы..................,..........................................69
Практические предложения...........................................70
Список литературы..................................................71
Список сокращенных обозначений.....................................91
Приложение.........................................................92
|
I
9
состояния фуражного зерна (22), основой которого стало изучение штаммов Fusarium, объединенных общей видовой принадлежностью и территориальным происхождением (популяций). Для токсикологической оценки культивирование каждого штамма проводили на зерновых субстратах в условиях, моделирующих периоды вегетации злаков, послеуборочного хранения зерна, а также его перезимовки под снегом (22). Этот экспериментальный прием, моделирующий изменчивость естественных факторов, таких как влажность и температура, получил высокую оценку специалистов и был признан перспективным для изучения токсинообразования возбудителей фузариоза колоса (10).
1.2 Современные подходы к систематике.
Вопросам традиционной таксономии грибов рода Fusarium, основанной на концепции «морфологического или типологического» вида, посвящена обширная литература (101). В разные годы было предложено несколько таксономических систем, в их числе весьма подробные, которые признавали более 100 видов и подвидов (75, 174), сжатые - всего 9 видов (147), а также -промежуточные между ними (40, 77, 89, 92, 125). Такое многообразие правил классификации привело к сложной ситуации в литературе по микотоксикологии Fusarium. Больше всего проблем возникло из-за обозначений F.tricinctum (Corda) Sacc. emend. Snnyd. & Hans, и F. roseum Lk. emend. Snyd. & Hans., введенных Снайдером и Хансеном (147). Первое из них объединяло по меньшей мере 4, а второе - 15 видов Fusarium, предусмотренных другими .системами. К сожалению, в их число попали многие виды, которые были причиной острых фузариотоксикозов людей и животных.
В этих условиях ст^ло крайне необходимым сформировать общий согласованный подход к систематике грибов Fusarium. Все предложенные классификации, кроме одной (147), были основаны на монументальной
работе Волленвебера и Рейнкинга (174), имели много общего, особенно в
i
отношении фитопатогенных и токсигенных грибов Fusarium, и отличались в
i
10
основном номенклатурой и признанием иодвидовых таксонов у определенных видов. С учетом мнений ведущих специалистов в этой области к применению были рекомендованы системы Буса (40), Нельсона (125) и классификация Герлаха и Ниренберг (75).
Видовая идентификация грибов Fusarium по морфологическим и культуральным признакам, таким как форма и размеры микроконидий, наличие монофиалид, полифиалид и хламидоспор, внешний вид мицелия, характер пигментации культур, а также скорость их роста на разных средах, специфические запахи и прочие, была и остается непростой задачей. Установление вида может быть корректно и достоверно выполнено только специалистами с высоким уровнем профессиональной подготовки и многолетним опытом работы. Неоднозначность при установлении вида может возникать из-за гетерогенности морфологических и культуральных признаков, разных сроков их появления, отсутствия полового спороношения у большинства видов, а также из-за склонности Fusarium к легким мутациям и к дегенерации при повторных пассажах на лабораторные среды.
Важная роль в решении этой проблемы принадлежит эталонным коллекциям грибов Fusarium. В 1985 году исследовательской группой доктора Марасоса была завершена 20-летняя кропотливая работа по поиску и подробному исследованию ранее описанных высокотоксигенных штаммов Fusarium (112). Культуры, собранные по всему миру, после повторной идентификации по системе Нельсона (125) составили основу Международной эталонной коллекции токсичных Fusarium (The International Toxic Fusarium Reference Collection, ITFRC) при исследовательском центре грибов рода Fusarium в Пенсильванском государственном университете США {Fusarium Research Center, Pennsylvania State University, University Park, PA). Уточнению видовой принадлежности грибов Fusarium в эти годы было уделено много внимания и в других широко известных коллекциях микроорганизмов общёго профиля.
- Київ+380960830922