СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.........................................................4
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ...............................................9
1.1 Идентификация микроорганизмов рода СогупеЬа<Тепит............9
1.2 Фенотипические свойства.....................................10
1.2.1 Морфологические свойства..................................10
1.2.2 Тинкториальные свойства...................................15
1.2.3 Культуральные свойства....................................17
1.2.4 Биохимические свойства....................................23
1.2.5 Патогенные и вирулентные свойства.........................28
1.3 Гепотипическне свойства.....................................34
1.4 Современные физико-химические методы биодетекции
и идентификации микроорганизмов.................................40
1.5 Использование метода сиектрофотометрии для исследования биообъектов и диагностики болезней животных.....................45
2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ......................................47
2.1 Материалы и методы..........................................47
2.1.1 Методологические подходы использования сиектрофотометрии для иден тификации и дифференциации микроорганизмов рода СогупеЬаШепшп...................................................49
2.1.2 Приборное, лабораторное и программное обеспечение
постановки опытов...............................................50
2.1.3 Использование методик аппроксимации и многомерной линейной регрессии для дополнительной обработки спектров поглощения
коринебактерий, полученных с помощью УФ-спектрофотометрии........53
2.2 Результаты исследований.....................................61
2.2.1 Изучение фенотипических свойств рода СогупеЬас1епит........61
2.2.1.1 Изучение морфологических свойств........................61
2.2.1.2 Изучение культуральных свойств..........................62
2.2.1.3 Изучение биохимических свойств...............................63
2.2.1.4 Изучение свойств культур С. рзеисІоиіЬегсіїІОБІз после долговременного хранения в лиофилизированном состоянии.............. 65
2.2.2 Определение устойчивости различных фенотипических форм
С. ряеисІоПіЬегсиІозіз ку-излучению..................................70
2.2.3 Идентификация и дифференциация микроорганизмов
методом УФ-слектрофотометрии.........................................73
2.2.3.1 Таксономия штаммов С.рБеисІоПіЬегсиІозіз по спектральным характеристикам......................................................75
2.2.3.2 Статистическая обработка экспериментальных
данных УФ-спекгрофотометрии..........................................82
2.2.3.3 Анализ спектральных характеристик исследуемых микроорганизмов с помощью методики аппроксимации.....................89
2.2.3.4 Использование комплексных критериев для оценки родовой и видовой принадлежности образцов исследуемых микроорганизмов..........95
2.2.3.5 Определение молярного процента гуанина цитозина по спектральным характеристикам и фенотипическим свойствам
штаммов С.р$еііс1оиіЬегси1о$і$......................................104
3 ОБСУЖДЕНИЕ........................................................118
ВЫВОДЫ..............................................................124
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ............................................125
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ...................................................126
В продолжении этих исследований Н. Marsh (1947), Е. Morse (1949, 1950) описывали данный микроорганизм как шаровидные бактерии, но среди них встречались толстые палочки, которые собирались в виде частокола с утолщениями на полюсах. В.М. Ту-манский (1952) описывал возбудителя казеозного лимфаденита как мелкую неподвижную палочку, кроме того встречались микроорганизмы в виде овоида и кокка.
Наблюдения вышеупомянутых авторов подтверждены в исследованиях К.Ф. Ламихова (1954), где он указал, что
С.pseudotuberculosis обладает ярко выраженной полиморфностыо. Также им установлено преобладание коккообразных форм, которые часто соединялись попарно и образовывали короткие цепочки, при росте на бульонных культурах. Однако на мясо-пептонном агаре (МПА) преобладали палочки и нити, а на средах с добавлением сыворотки крови - небольшие палочки с закругленными концами.
Работая с материалом от павших и вынуждено убитых баранов с клиническим проявлением орхиэпидидимита М.М. Халимбе-ковым и др. (1961) выделили мелких бактерий коккообразной формы, располагавшихся парами или ввиде цепочек. Аналогичные схемы расположения микробных клеток выявил П.П. Самойлов (1965) в мазках из патологического материала от девяти абортированных плодов и пяти трупов ягнят в возрасте or 1 до 5-ти дней.
Его наблюдения были подтверждены исследованиями Э А Шегидевича (1969) и L.W. Turner (1973), которые установили, что во многих случаях длина микробных клеток варьирует от нескольких мкм до 10 и более, толщина же - от 0,3 до 1,0 мкм, но данные параметры менялись даже среди микроорганизмов одной культуры. Часто микробные клетки различных форм объединялись
14
в небольшие группы. Палочковидные напоминали иероглифы или частокол. Исследователи установили, что овоидные с возрастом могут формировать различного рода цепочки.
Для исследования ультраструктуры С.pseudotuberculosis
О.С. Hard (1969) пользовался электронным микроскопом. Результаты его исследования показали, что чаще встречается овоидная форма клеток микроорганизма наряду с продолговатой или булавовидной. Ширина бактерий варьировала от 0,55 мкм до 0,4, а длина - от 0,5 до 1,2 мкм. G.C. Hard, высказал предположение, что одной из главных характеристик этого микроорганизма является наличие электронно-уплотненного слоя, который окружает каждую микробную клетку. Между стенкой клетки и электронно-уплотненным слоем находится узкое пространство 6,4-8,0 им. Толщина данного слоя у разных штаммов различна. Наиболее широкий и плотный слой был у вирулентного штамма, величина его была 18,0 нм, у ослабленных же штаммов он был меньше - 9-10 нм. Микроорганизмы собираются в глыбки и обволакиваются одним общим слоем, который, как отмечал автор, был липидным.
В мазках из молодых агаровых культур И.Г. Трофимов (1984) наблюдал, в основном, короткие толстые палочки с закругленными концами, часто встречались палочки расположенные под углом друг к другу. Данное расположение в мазке автор назвал «уголками». По мнению автора, этот признак можно применять как дифференциальный. Наличие в молодых культурах «уголков» подтверждает принадлежность микроорганизмов к роду коринебакте-рий. Р. Стейнер (1979) ранее подтвердил мнение предыдущего автора, отмечая, что роду коринебактерий присущ «разламывающий» гип деления, который приводит к характерному их расположению под углом друг к другу.
- Київ+380960830922