Список сокращений
АВ - антигенный вариант;
ВБ - вирус бешенства;
ВНА - вирус нейтрализующие антитела;
ДНК- дезоксирибонуклеиновая кислота;
ИГХМ - иммуногистохимический метод;
ИФА - иммуноферментный анализ;
КРС - крупный рогатый скот; к ДНК - копия ДНК с РНК-матрицы;
ME - международные единицы;
МКА - моноклональные антитела;
MPC - мелкий рогатый скот; н.о. - нуклеотидное основание;
ОТ ПЦР - обратно-транскиптазная полимеразная цепная реакция; V/ РДП - реакция диффузной преципитации;
РИФ - реакция иммунофлюоресценции;
РНК - рибонуклеиновая кислота;
РПИФ - реакция подавления иммунофлюоресценции;
TCID - Культурально-клеточные инфекционные дозы;
ФИТЦ-глобулин - флюоресцирующий глобулин;
ФСК - фетальная сыворотка КРС;
ЦНС - центральная нервная система;
у-регион - псевдоген, гипервариабельная межтшая область, находящаяся между G и L-генами.
Содержание Сп>.
1. Введение 4
2. Обзор литературы 10
2.1. Характеристика возбудителя бешенства и его молекулярно-биологические свойства
2.2. Эпизоотологические данные и ситуация по бешенству в России и в мире 1К
2.3. Патогенез, клинические признаки и
патологоанатомические изменения при бешенстве 24
2.4. Лабораторная диагностика бешенства 27
2.5. Лабораторные, вакцинные штаммы вируса бешенства и антирабические вакцины 35
2.6. Заключение по обзору литературы 44
3. Собственные исследования 47
3.1. Материалы и методы исследований 47
3.2. Результаты собственных исследований 63
3.2.1. Разработка и испытание набора препаратов для диагностики бешенства в РИФ 63
3.2.2. Изучение полевых изолятов и вакцинных штаммов вируса бешенства с использованием моноклональных антител 72
3.2.3. Выявление генома вируса бешенства в ПЦР 80
3.2.4. Нуклеотидное секвенирование и филогенетический анализ 83
3.2.5. Испытание иммуногенности и безвредности оральной антирабической вакцины “Синраб”. 95
4. Обсуждение результатов 101
5. Выводы 112
6. Практические предложения из
7. Список литературы ,14
Приложения 134
14
3. Раздевание ' У/К
удаление / >^г \ 2. Проникновение
сЛопочжу'' £& вход вируса
V. /ЧҐ - г^
^ \
1. Адсорбция Влаимодейстиие ь вируса и рфцсіпора
4. Транскрипция^ \
синтез мРНК ^ "Г-- ,-Г^ Я*гВ«з.и-ол.йс„н.
5. Трансляция ^______________________________
Синтез струимых ,.‘Ч А
белков Ч-Ч- і ** V ') '•< *,/ .;Ц;'чч,РОцепторЫ
\ ч^‘> с.:-'1 , Алегки хозяина
Гликозиляция
*4. V . ... .
Связывание
ъ
обратные вирионы
6. Процессинг 44 ■' . / *'^^9.
коэиляция С-конц* , <ч;їв.- 'К \
/.у^
7. РеплиКфйИЯ ч ЛЙ»! „ \ 7°*
Производство • 'Ж
геномной РНК 1 Щї
8. Сборка
/
і
Рисунок 3. Жизненный цикл вируса бешенства внутри клетки хоіннна (рисунок И ! www.cilc.gov).
Кодируемая вирусом полимераза транскрибирует геномную РНК с образованием лидерной РНК и пяти полиаденилированных мРНК, которые транслируются в белки. Трансляция, которая включает синтез белков Ы, І*, М, С і и Ц происходит на свободных рибосомах в цитоплазме. Хотя синтез (Ї-белка инициируется на свободных рибосомах, завершение синтеза и гликозилирование, происходят в эндоплазматическом ретикулуме и аппарате Гольджи. Переключение с трансляции на репликацию регулируется внутриклеточным соотношением лидерной РНК к Ы-белку. Когда гакое переключение активируется, начинается репликация вирусного генома.
Первой стадией репликации вируса бешенства является синтез полноразмерной копии (позитивной спирали) вирусного генома. После переключения на репликацию, транскрипция РНК становится постоянной (ипоп-8и>р”) и стоп-кодоны игнорируются. Вирусная полимераза присоединяется к единичному сайту на 3’ конце генома и продолжает
синтезировать полноразмерную копию генома. Образующиеся положительные спирали вирусной РНК служат матрицей для синтеза негативной полноразмерной спирали вирусного генома.
В течение процесса сборки, N-P-L комплекс инкапсулирует негативную спиральную геномную РНК, формируя сердцевину РНП, а М-белок формирует капсулу или матрикс для РНП. Комплекс. М-РНП мигрирует в область плазматической мембраны, содержащую гликопротеиновые вставки, а М-белок инициирует свертывание. Комплекс М-РНП соединяется с гликопротеином и законченными вирусными почками из плазматической мембраны. В центральной нервной системе (ЦНС) почкование происходит главным образом из плазматических мембран. Напротив, в слюнных железах вирус чаще почкуется из клеточной мембраны.
Доказано наличие особого механизма, который запускается при инфицировании клеток ЦНС вирусом бешенства. Этот механизм заключается в том, что Т-клетки, экспрессирующие на своей поверхности рецепторы Fas, подвергаются апоптозу после присоединения к FasL лигандам инфицированных клеток, что позволяет вирусу бешенства, находящемуся внутри клетки, избегать уничтожения [114].
Молекулярно-биологические свойства. В 1978 году впервые были получены моноклональные антитела (МКА) к вирусу бешенства, что дало возможность идентифицировать и изучать характеристики различных изолятов вируса бешенства, а также позволило дифференцировать полевые изоляты и вакцинные штаммы [193]. С помощью МКА, полученных па определенные вирусные белки, были изучены их антигенные и функциональные свойства. Пак, Luo et al. (1998) изучили гликонротеин вируса бешенства с использованием панели из 35 МКА и сделали выводы о том, что почти псе эпитопы G-белка являются конформационно-зависимыми и что G-белок формирует законченную антигенную структуру. Goto et al. (2000) показали возможность использования МКА для картирования эпитопов и структурного
- Київ+380960830922