СОДЕРЖАНИЕ
Стр
Список условных обозначений и сокращений________________________________ 5
Общая характеристика работы______________________________________________ 6
1. Обзор литературы
1.1. Общая характеристика аденовирусов_____________________________ 12
1.1.1. Общая характеристика представителей
Семейства Асіепоуігісіае___________________________________________ 12
1.2. Общие сведения об аденовирусной инфекции____________________
крупного рогатого скота. Историческая справка__________________ 14
1.3. Структурная характеристика аденовириона___________________
1.3.1. Строение вирусного нуклеокапсида_______________________________ 19
1.4 . Физико-химические свойства структурных
белков аденовириона____________________________________________ 21
1.4.1. Основной структурный белок аденовириона - гексон__________ 21
1.4.2. Структурные белки аденовириов__________________________________ 25
1.4.3. Антигенная структура белков аденовирусов_______________________ 25
1.4.4. Антигенные свойства гексона____________________________________ 26
1.5. Методы лабораторной диагностики
вирусных болезней животных_____________________________________ 28
1.6. Использование РЛА в диагностики вирусных заболеваний 30
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы________________________________________________________ 44
2.1.1. Биологические препараты_________________________________________44
2.1.2. Питательные среды и реактивы___________________________________ 45
2.2. Методы исследования____________________________________________ 46
2.2.1. Получение монослойной культуры клеток ТБ_______________________ 46
2.2.2. Получение монослойных культур перевиваемых линий клеток
МЛВК, ЛЕК, ППЭК_________________________________________________ 46
2
2.2.3. Получение монослойной перевиваемой культуры
клеток почек теленка Taurus 1 ( Т - 1).___________________
2.2.4. Получение монослойных культур перевиваемых линий клеток Taurus 2 (Т- 2), Taurus 4 (Т -4)__________________________________
2.2.5. Культивирование аденовируса на перевиваемой линии Taurus 1 , выращенной на микроносителях «Цитолар - 3»_____________
2.2.6. Получение аденовируса Bovine - 10 методом суспензионного культивирования в перевираемой
линии клеток MDBK___________________________________________
2.2.7. Клонирование аденовирусов методом бляшек___________________
2.2.8. Экстракция гексонов аденовирусов___________________________
2.2.9. Гидрофобная хроматография__________________________________
2.2.10. Анионообменная хроматография______________________________
2.2.11. Электрофорез в полиакриламидном геле______________________
2.2.12. Постановка реакции нейтрализации__________________________
2.2.13. Постановка реакции гемагглюпгинации_______________________
2.2.1.4. Получение гипериммунных сывороток________________________
2.2.1.5. Статистическая обработка данных__________________________
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ НССЛВДОВАППЙ
3.1. Эпизоотолотческий мониторинг за период 1998-2003 г на
некоторые вирусы, вызывающие респираторно - кишечную патологию крупного рогатого скота в хозяйствах РФ_________
3.1.2 Изучение роли аденовируса крупного рогатого скота в
хозяйствах Московской области за период 1998-2003 гг______
3.2.1. Скрининг клеточных культур, чувствительных к аденовирусам крупного рогатого скота___________________________________________
3.2.2. Клонирование аденовирусов под агаровым покрытием___________
3.2.3. Культивирование аденовируса в культуре клеток
Т-1, выращенной на микроносителях « Цитолар»________________
1.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ
Ы.Общая характеристика аденовирусов
I Семейство аденовирусов (Family adenoviridae) насчитывает более 100
серотипов или видов, выделенных от человека, млекопитающих и птиц (86 ). Они широко распространены в природе, являясь возбудителями заболеваний дыхательных путей и кишечника позвоночных различных видов, в первую очередь млекопитающих и птиц.
Аденовирусы открыл в 1953 г. W.P.Rowe, выделив их из хирургически удаленных детских аденоидов. Вирусы этой же группы независимо от предыдущего автора выделили M.R.Hilleman, J.R.Werner в 1954 г.из смывов ротовой полости пациентов с острыми респираторными ^ заболеваниями. В последующие годы были идентифицированы аденовирусы,
поражающие различные виды животных, в том числе птиц. Название выделенных агентов «аденовирусы» предложено в 1956 г (56,135 ) .
Вирусы, входящие в семейство Adenoviridae, близки по структуре, физическим и химическим свойствам (57, 135 ) .
1.1.1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ СЕМЕЙСТВА Adenoviridae.
Аденовирусы (от грсч. aden, adenos-желсза) - группа вирусов, поражающая животных, в том числе и птиц. Они широко распространены в I природе, являясь возбудителями заболеваний дыхательных путей и
кишечника позвоночных различных видов, в первую очередь млекопитающих и птиц.Вирионы аденовирусов представляют собой лишенные суперкапсидной оболочки изометрические частицы диаметром 70-90 им. Они состоят из сердцевины, содержащей ДНК и белок, икосаэдрического капсида, построенного из 252 капсомеров, из которых 240 гексоны и 12 пептоны, Последние расположены на вершинах икосаэдра и состоит из основания и длинного отростка (нити). Каждый пептон окружен 5-ю гексонами, а каждый
12
>
гексон- 6-ю соседними капсомерами. Вирионах аденовирусов содержится 86-88% белка и 12-14% ДНК. Молекулярная масса вирионов 170 МД, плавучая плотность в CsCI2 1,32-1,35 г/ см*, коэффициент седиментации 560S. * Аденовирусы стабильны при pH 6-9, устойчивы к растворителям липидов, но
быстро инактивируются при 56°С.
Геном аденовирусов представлен единой 2-спиральной молекулой ДНК с молекулярной массой 20-25 МД (35-36 тысяч п.н.). На концах молекулы ДНК имеются инвертированные повторы длинной 50-200 п.н. Каждый 5-конец молекулы ДНК ковалентно связан с белком (55кД). Доля Г+Ц составляет 48-61%, у аденовирусов птиц-54-55%. ДНК обладает инфекционностью. В вирионах обнаружено 10 полипептидов с мол. М.5-120 кД. Полипептид гексонов имеет труп по- и типоспецифические антигенные ^ детерминанты. Последние индуцируют синтез антител, нейтрализующих
инфекционную активность вируса .( 24,25,31,50,51,77,78,80,95 )
Нить пептона отвечает за адсорбцию вириона на поверхности клетки и образование антител, обладающих вируснейтрализирующей активностью. Полипептиды синтезируются в цитоплазме клеток, тогда как транскрипция и репликация ДНК, сборка вириона осуществляется в ядре. Аденовирусы выходят из клеток в незначительном количестве. Даже при полном их разрушении в культуральной жидкости обнаруживают менее 10% I синтезированного вируса (100).
Семейство состоит из 2-х родов: Mastadenovirus, Aviadenovirus. 1 .Род: Mastadenovirus(oT греч. mastos - молочная железа). В состав рода входят аденовирусы млекопитающих: человека (47серотипов), обезьян (27), КРС (10), свиней (4), овец (6), коз (1), лошадей (1), собак (2), мышей (2 серотипа). Типичным представителем рода является аденовирус человека серотипа 2.
2. Род: Aviadenovirus (от лат. avis-птица). В состав рода входят аденовирусы птиц: кур (12 ссротипов), индеек (3), уток (2), фазанов (1
13
>
- Київ+380960830922