СОДЕРЖАНИЕ
Список сокращений 4
ВВЕДЕНИЕ 5
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 11
1.1 Значение нетуберкулезных микобактерий в инфекционной патологии 11
1.2 Механизмы развития иммунологического ответа на
микобактериальные антигены 17
1.3 Совершенствование технологии изготовления
туберкулиновых препаратов 22
1.3.1 Применение мембранных методов в очистке
белковых препаратов 30
1.3.2 Современные требования к туберкулиновым
аллергодиагиостикумам 34
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 40
2.1 Материалы, экспериментальные модели и условия экспериментов 40
2.2. Методы исследований 41
2.3. Статистическая обработка результатов исследования 44
3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 48
3.1 Разработка мембранных методов очистки белков 48
3.1.1 Оценка возможности мембранного фракционирования
белков туберкулина 48
3.1.2 Сравнительная оценка режимов микрофильтрации культуральной жидкости М. avium на шихтных
фильтрах марки «Ф» и керамических мембранах 56
3.1.3 Отработка условий концентрированиям
диафильтрации протеина с использованием мембранной технологии 62
2
3.1.4 Разработка метода стерилизующей фильтрации концентрата туберкулина (ППД) для птиц
3.2 Анализ выхода белка туберкулина при осаждении его различными концентрациями ТХУ
3.3 Разработка технологии изготовления туберкулина очищенного (ППД) для птиц в стандартном разведении
3.3.1 Изготовление стандартного раствора туберкулина очищенного (ППД) для птиц
3.3.2 Оценка стабильности туберкулина очищенного (ППД) для птиц в стандартном разведении
3.4 Разработка нормативной документации на туберкулин очищенный (ППД) для птиц в соответствии с требованиями международных нормативных документов
3.4.1 Оценка качественных характеристик туберкулина с использованием методов контроля, предусмотренных международной нормативной документацией
3.4.2 Изготовление и контроль эталонной серии туберкулина очищенного (ППД) для птиц в соответствии
с международными требованиями
3.4.3 Сравнительное изучение биологических свойств отечественного туберкулина очищенного (ППД) для птиц в стандартном разведении и туберкулинов зарубежных фирм-изготовителей
4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ПРИЛОЖЕНИЯ
65
68
77
77
80
86
86
95
101
105
121
122
123
142
3
что свидетельствовало о начальной стадии гетероморфизма, связанного с дефектностью клеточных стенок.
Несмотря на структурно-функциональные изменения, происходящие в популяциях микобактерий при воздействии различных факторов окружающей среды, микобактерии оказались способны к реверсии в исходное состояние при благоприятных условиях. Эта способность позволяет им длительно выживать- и циркулировать в окружающей среде, что обусловливает особое санитарное и эпидемиологическое значение нетуберкулезных микобактерий.
Способность М. avium вызывать прогрессирующее заболевание может быть связана с наличием определённых компонентов клеточной стенки и некоторых сложных липидов типа тяжа, серосодержащих гликолипидов или кислотных липидов [173, 181]. Па основании изучения белкового состава микобактерий, который специфичен для представителей различных видов и обусловлен генетически, обнаружили близкое сходство денситограмм М. avium и М. intracelluläre, что послужило основанием для отнесения М. avium к нефотохромогенным атипичным микобактериям [47].
Эти микобактерии не относятся к так называемому комплексу микобактерий туберкулеза (М. tuberculosis complex) представители которого вызывают патологию у человека и животных. Термин нетуберкулезные микобактерии в настоящее время заменил использовавшийся ранее термин «атипичные микобактерии», который включает в себя распространенные в окружающей среде микобактерии [107,140]. Важным отличием нетуберкулезных микобактерий от комплекса микобактерий туберкулеза является то, что они практически не передаются от индивида к индивиду [113, 115, 127, 139, 161].
Окончательной классификации нетуберкулёзных микобактерий не разработано, но наиболее признанной считается классификация, предложенная Е. Runyon в 1954 году [184]. Нетуберкулёзные микобактерии в зависимости от способности давать рост колоний на плотных питательных
14
средах в течение более или менее семи дней делят на две группы — медленнорастущие и быстрорастущие. Медленнорастущие микобактерии делят на три группы: фотохромогенные — образующие жёлтый пигмент на свету, скотохромогенные - не требующие света для образования пигмента, и нефотохромогенные микобактерии, не образующие пигмент [111 , 133, 125].
Позднее были предложены варианты классификации, основанные на генетическом родстве микобактерий, например, классификация Buraczewska (1964), а также базирующиеся на биохимических свойствах микобактерий и на математическом методе сравнения отдельных свойств - нумерическая таксономия [26].
Наибольшее значение в клинической практике имеют нетуберкулёзные микобактерии М. avium, М. intracellulare, М. kansasii, М. paratuberculosis, М. scrofulaceum, М. simiae, М. interjectum, М. habana, М. szulgai и др. [39, 55, 126, 128, 129, 187, 188, 192].
Возникновение патологии, вызванной нетуберкулезными микобактериями, связано не только с высоким содержанием микобактерий в окружающей среде, но и в значительной мере определяется индивидуальной чувствительностью организма к этим инфекциям [43, 117, 118, 130, 144] Несмотря на то, что нетуберкулезные микобактерии вызывают различную патологию у человека и животных, проведенные серологические исследования не выявили возможности передачи этих инфекций от животных к человеку [182]. Молекулярно-генетические исследования также показали, что штаммы одних и тех же видов нетуберкулезных микобактерий, вызывающих заболевание у животных и людей, разнос [92, 136]. Вместе с тем имеются и другие данные. Так, сочетание М. avium-M. paratuberculosis является этиологическим фактором болезни Ионе у крупного рогатого скота и болезни Крона у человека. Было найдено значительное генетическое сходство штаммов М. avium, полученных от людей и животных с данной патологией. Показано, что М. avium может вызывать бактериемию с
15
- Київ+380960830922