Инфекционный ринотрахеит и вирусная диарея крупного рогатого скота : диагностика, молекулярно-биологические свойства возбудителей, эффективность противовирусных препаратов

СОДЕРЖАНИЕ
Стр.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ..................................... 6
ВВЕДЕНИЕ.............................................. 7
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ..................................... 17
1. Характеристика инфекционного ринотрахеита 17
крупного рогатого скота............................
2. Латентная форма инфекционного ринотрахеита 21 крупного рогатого скота, ее влияние на диагностику, специфическую профилактику заболевания и
эпизоотологическое значение........................
3. Структура и функционирование генома вируса 24
инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота
4. Методы молекулярной биологии и их использование в 26
диагностике и молекулярной эпизоотологии инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота
4.1. Рестрикционное картирование....................... 26
4.2. Исследования по молекулярной эпизоотологии 28
инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
4.3. Конструирование молекулярных зондов для выявления 30
нуклеотидных последовательностей вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и их применение для диагностики болезни................
4.4. Разработка и применение полимеразной цепной 33
реакции для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого.................................
4.5. Методы оценки полиморфизма ДНК.................. 37
5. Иммунный ответ на инфекцию вирусом 38
2
45
50
52
54
55
57
60
60
61
65
66
67
68
инфекционного рииотрахеита крупного рогатого скота Экспериментальные инфекции, вызванные вирусом инфекционного рииотрахеита крупного рогатого скота Характеристика вирусной диареи-болезни слизистых
крупного рогатого скота..............................
Особенности клинического проявления вирусной
диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота.....
Особенности патогенеза вирусной диареи-болезни
слизистых крупного рогатого скота....................
Серологическая диагностика вирусной диареи-болезни
слизистых крупного рогатого скота....................
Экспериментальные инфекции, вызванные вирусом вирусной диареи-болезни слизистых крупного рогатого
скота...............................................
Иммунология вирусной диареи-болезни слизистых
крупного рогатого скота..............................
Иммуносупрессивное действие нецитопатогенных и цитопатогенных биотипов вируса вирусной диареи-
болезни слизистых крупного рогатого скота............
Подавление врожденного иммунитета с последующим
установлением персистентной инфекции.................
Роль вирусов инфекционного рииотрахеита и вирусной диареи-болезни слизистых в развитии респираторных
болезней молодняка крупного рогатого скота...........
Влияние вирусов на клетки эпителия респираторных
путей...............................................
Влияние вирусов на иммунные механизмы................
Применение противовирусных препаратов при инфекционном ринотрахеите и вирусной диарее-
3
основывались на нуклеотидной последовательности гена gD. Из 162 зякулятов 51 был положительным по результатам выделения вируса, а ГТТДР выявила 73. ЗГТЦР выявляла ДИК в течение более длительного периода после инфицирования и реактивации.
R.S. Kataria et al. (1997) для обнаружения BHV-1 в сперме быков использовали ПЦР, чувствительность которой была в 10б раз выше, чем нерадиоактивный метод дот-блот-гибридизации. Из трех пар праймеров наиболее чувствительными оказались праймеры на gC, выявлявшие 0,01 ТЦДзо/мл вируса в сперме.
М.А. Rocha et al. (1998, 1999) предложили способ выявления BHV-1 в сперме быка и надосадочной вируссодержатцей жидкости с чувствительностью 0,001 ТЩЬа/ш , а также в тканях инфицированного плода при помощи нестед-ПЦР.
М. Fuchs et al. (1999) сообщают о попытке выявления BHV-1 в пробах цельной крови, полученных от естественно инфицированного КРС. ПЦР с праймерами на гены гликопротеинов В, С и Е BHV-1 позволяет выявлять одну копию ДНК в 105 - 107 периферических лейкоцитах. Результаты показали, что ДНК вируса может выявляться не только в периферической крови остро инфицированного КРС, но и, что более важно, в периферической крови субклинически больных животных. Представленная gE-специфичная ПЦР позволяет различать животных, инфицированных диким типом вируса и вакцинированных. По данным исследователей, ПЦР позволяет выявлять BHV-1 до сероконверсии и даже у серонегативных животных.
J. Zhou et al. (1999) для выявления BHV-1 в сперме быков применяли метод амплификации протеина с последующей ПЦР с праймерами на крайне консервативный ген gD. Этот метод оказался в 200 раз более чувствителен, чем традиционная ПЦР.
35
S. Moore et al. (2000) представили ГИДР для выявления ДНК BHV-1 в рутинной диагностике. Метод выявляет как 1.1, так и 1.2 подтипы BHV-1. Чувствительность ГЩР составила 0,125 ТЦД5о/мл. Для сравнения эффективности ПЦР с методами выделения вируса и ИФА провели исследование 105 проб биоматериала от КРС с признаками респираторного заболевания. ПЦР выявляла ДНК вируса во всех пробах, положительных по вирусовыделению. ДНК вируса выявляли также в пробах свежей и замороженной спермы С чувствительностью 1 ТЦЦ50/50МКЛ- Метод выявлял также ДНК BHV-5, позволяя проводить дифференциацию между ним и BHV-1 по размеру амплифицированного продукта. Авторы пришли к выводу, что ПЦР более чувствительна и не зависит от качества проб, в отличие от методов выделения вируса и ИФА.
В литературе имеются сообщения о выявлении ДНК вируса при помощи ПЦР в сперме (A.L. de Gee et al.,1996; R.S. Kataria et al., 1997; J. Rola, 1997; J. Rola et al., 1999; J. Zhou et al., 1999; A. Candido et al., 2000; D. Deregt et al., 2000; C.B. Smits et al.; 2000), пробах цельной крови (M. Fuchs et al., 1999), культуральной жидкости (В.P. Sreenivasa et al., 1996), полевых изолятах (S.A. Nadin-Davis et al., 1996; A. Salwa, 1997; S. Moore, et al.,
1995), пробах биоматериала от телят (A.S. Mweene et al.,1996 а, в).
В доступной литературе отсутствуют данные по разработке и использованию отечественными исследователями метода ПЦР для выявления BHV-1.
Таким образом, разработка и применение метода ПЦР для диагностики ИРТ КРС имеет большое значение. Данный метод позволяет проводить диагностику заболевания с более высокой чувствительностью и специфичностью, чем использование традиционных методов. ПЦР дает возможность следить за ранними стадиями развития инфекции, выявлять ее латентные формы, обнаруживать вирус в любом биоматериале, и, что
36