Иммуноферментный анализ в диагностике вирусной диареи крупного рогатого скота

2
Оглавление
1 ВВЕДЕНИЕ ....................................................5
1.1 Актуальность..................................................5
1.2 Цель и задачи исследовании....................................7
1.3 Научная новизна...............................................8
1.4 Практическая значимость.......................................8
1.5 Основные положения, выносимые на защиту:......................9
1.6 Личный вклад соискателя.......................................9
1.7 Апробация работы..............................................9
1.8 Публикация результатов исследований..........................10
2 Обзор литературы........................................... 11
2.1 Вирусные респираторные инфекции крупного рогатого
скота........................................................11
2.2 Вирусная диарея крупного рогатого скота......................12
2.3 Лабораторная диагностика вирусных респираторных
инфекций крупного рогатого скота.............................20
2.3.1 Общие принципы лабораторной диагностики вирусных респираторных
инфекций крупного рогатого скота.............................20
2.3.2 Реакция нейтрализации........................................21
2.3.3 Реакция связывания комплемента...............................24
2.3.4 Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)......................26
2.3.5 Иммуноферментный анализ (ИФА)................................30
2.3.6 Анализ данных литературы.....................................33
3 Собственные исследования.....................................34
3.1 Материалы....................................................34
3.1.1 Штаммы вирусов:..............................................34
3.1.2 Диагностические сыворотки....................................35
3.1.3 Реактивы.....................................................35
3.1.4 Конъюгаты....................................................35
3.1.5 Клеточные культуры...........................................35
3.1.6 Среды........................................................36
3.1.7 Объекты исследований.........................................36
3.1.8 Животные.....................................................36
3.2 Методы.......................................................36
3.2.1 Клинико-эпизоотологические методы исследований...............37
3.2.2 Вирусологические методы исследований.........................37
3
3.2.3 Иммунологические методы.......................................38
3.2.3.1 Реакция нейтрализации.........................................39
3.2.3.2 Реакция иммунодиффузии........................................39
3.2.3.3 Реакция непрямой гемагглютинации..............................40
3.2.3.4 Твердофазный иммуноферментный анализ..........................40
3.2.4 Статистические методы.........................................41
3.3 Эпизоотологический мониторинг респираторных и желудочно-кишечных болезней телят, маститов и эндометритов у коров в хозяйствах Смоленской области 41
3.3.1 Распространение респираторных и желудочно-кишечных болезней
телят, маститов и эндометритов у коров.........................41
3.3.2 Изучение этиологии энтеритов телят в Смоленской области........47
3.4 Разработка методов выявления специфических антител
и антигенов вируса диареи крупного рогатого скота..............51
3.4.1 Получение гипериммунной сыворотки против возбудителя вирусной
диареи крупного рогатого скота.................................51
3.4.2 Совершенствование методов ТФ ИФА для выявления антител к
вирусу диареи крупного рогатого скота..........................54
3.4.2.1 Определение специфичности метода ТФ ИФА для обнаружения антител к вирусу ВД КРС в сыворотках крови КРС.............................64
3.4.3 Разработка конкурентного метода ТФ ИФА для выявления антигенов к
вирусу диареи КРС..............................................65
3.4.3.1 Определение специфичности конкурентного метода ТФ ИФА для обнаружения антигена вируса диареи КРС в биологическом материале.71
3.4.4 Определение оптимальных параметров постановки ТФ ИФА для выявления специфических к вирусу диареи КРС антител в сборном
молоке коров........................................72
3.4.5 Сравнительная эффективность различных методов выявления антител к вирусу диареи в сыворотке крови крупного рогатого скота......................................................76
3.5 Серологический мониторинг вирусной диареи в
хозяйствах Смоленской области с использованием ИФА..78
3.6 Схема лабораторной диагностики вирусной диареи КРС...79
3.7 Экономическая эффективность диагаостических
мероприятий при вирусной диареи телят...............81
4 Обсуждение...........................................82
5 Выводы...............................................87
6 Практические предложения.............................88
7 Список литературы....................................88
8 Приложение 105
Всего в течение 1999-2003 гг. при проведении диагностических исследований в указанных учреждениях исследовано 457 проб материалов от больных коров и телят 1-6 месячного возраста. Выполнено более 700 экспертизных исследований.
1.5 Основные положения, выносимые на защиту:
1. Причины заболеваемости и падежа молодняка КРС при болезнях респираторной и желудочно-кишечной этиологии, заболеваемости коров маститами и эндометритами в хозяйствах Смоленской области.
2. Характеристика иммунореагентов и методов диагностики вирусной диареи крупного рогатого скота, разработанных на основе твердофазного иммуноферментного анализа для обнаружения специфических антигенов возбудителя в патологическом материале и специфических антител к возбудителю болезни в сыворотке крови КРС, молозиве и молоке коров.
3. Усовершенствованная схема лабораторной диагностики вирусной диареи крупного рогатого скота, основанная на применении методов твердофазного иммуноферментного анализа.
4. Распространение вирусной диареи крупного рогатого скота в хозяйствах Смоленской области, установленное с использованием разработанных методов твердофазного иммуноферментного анализа.
1.6 Личный вклад соискателя
Представленные в диссертационной работе экспериментальные исследования, теоретический и практический анализ полученных результатов проведены автором самостоятельно. В выполнении работы по разделал! 3.3.1,
3.3.2, 3.4.1., З.4.4., 3.7. практическую и консультативную помощь оказывали сотрудники ГНУ СНИВС: Гамаюнов В.М., Турлаков А.П. Авторский вклад соискателя - около 80%.
1.7 Апробация работы
Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены на
10
заседаниях Ученого Совета Смоленской НИВС (1999-2002 гг.),
Международной научно-практической конференции «Биолого-экологические проблемы заразных болезней диких животных и их роль в патологии сельскохозяйственных животных и людей, (г. Покров, 2002 г.); Международной научно-практической конференции «ИЭКВМ - 80 лет на передовом рубеже ветеринарной науки (г.Харьков, 2002 г.); Международной научно-практической конференции «Досягнення та перспективи розвитку ветеринарної медицини» (Полтава, 2002 г.); Научно-производственной конференции «Внедрение достижений ветеринарной науки в сельскохозяйственное производство», посвященной 70-летию Смоленской НИВС (Смоленск, 2002).
1.8 Публикация результатов исследований
По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы.