Оглавление:
1. ВВЕДЕНИЕ..........................................................5
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.................................................10
2.1. Характеристика вируса ньюкаслской болезни....................10
2.2. Эпизоотология ньюкаслской болезни птиц.......................15
2.3. Специфическая профилактика ньюкаслской болезни...............18
2.4. Культивирование вируса ньюкаслской болезни в перевиваемых линиях клеток..........................................................21
2.5. Культуральные вакцины против ньюкаслской болезни.............26
2.6. Иммунный ответ при ньюкаслской болезни.......................33
2.7. Заключение по обзору литературы..............................36
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.........................................38
3.1. Материалы....................................................38
3.1.1. Вирус ньюкаслской болезни................................38
3.1.2. Животные.................................................38
3.1.3. Клеточные культуры..................................... 38
3.1.4. Питательные среды и растворы.............................38
3.1.5. Реактивы.................................................39
3.1.6. Оборудование.............................................39
3.2. Методы.......................................................40
3.2.1. Определение среднего времени гибели 10-суточных эмбрионов, вызванной минимальной летальной дозой.......................40
3.2.2. Определение интрацеребрального индекса патогенности......41
3.2.3. Дифференциация вируса ньюкаслской болезни методом рестрикционного анализа продуктов ПЦР.......................41
3.2.4. Культивирование вируса в культурах клеток................43
3.2.5. Культивирование в присутствии трипсина...................43
3.2.6. Определение инфекционной активности вируса...............44
3.2.7. Лиофилизация.............................................45
3.2.8. Определение антигенности и иммуногенности................47
3.2.9. Определение титра антигемагглютининов....................49
3.3. Результаты исследований......................................50
3.3.1. Определение среднего времени гибели 10-суточных эмбрионов, вызванной минимальной летальной дозой...........................50
3
3.3.2. Определение интрацеребрального индекса патогенности....51
3.3.3. Дифференциация вируса ньюкаслской болезни методом рестрикционного анализа продуктов ПЦР.....................52
3.3.4. Подбор чувствительной клеточной культуры и штамма вируса.... 53
3.3.5. Определение оптимальной множественности заражения культур клеток....................................................57
3.3.6. Роллериое и стационарное культивирование...............59
3.3.7. Культивирование вируса НБ в присутствии трипсина.......60
3.3.8. Определение антигенности и иммуногенности культуральных вариантов штамма “М ВНИИВВиМ” ВНБ.........................61
3.3.9. Определение антигенности и иммуногенности вариантов штамма “М ВНИИВВиМ” ВНБ, полученных при культивировании в роллерном и стационарном монослое клеток..............................64
3.3.10. Определение иммунизирующей дозы.......................68
3.3.11. Определение чувствительности цесарок к вирусу ньюкаслской болезни...................................................69
3.3.12. Выбор защитной среды..................................70
3.3.13. Разработка экспериментальной серии вакцины против ньюкаслской болезни из штамма “М ВНИИВВиМ” культуральной сухой.....................................................74
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ........................................78
5. ВЫВОДЫ........................................................87
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ......................................89
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.............................................90
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Характеристика вируса ньюкаслской болезни
Ньюкаслская болезнь - высоко контагиозная вирусная инфекция, главным образом куриных, характеризующаяся пневмонией, энцефалитом, множественными точечными кровоизлияниями и поражением внутренних органов. Она зарегистрирована на всех континентах. Ньюкаслская болезнь наносит громадный экономический ущерб и относится к особо опасным инфекциям [28].
' Несмотря на значительные успехи в эпизоотологии, диагностике, и изучении патогенности вируса на молекулярном уровне, проблема борьбы с этой особо опасной болезнью птиц остается актуальной во всем мире. В последние годы НБ является серьезной проблемой в Европе, причем не только в регионах, традиционно неблагополучных по данной болезни, но и в странах, исторически свободных от нее на протяжении десятилетий [16, 33].
Проведение массовой вакцинации против НБ не позволяет полностью избавиться от данного заболевания. Одной из причин этого является высокая плотность размещения выращиваемой птицы при промышленном содержании [148]. Вспышки НБ возникают еще и потому, что эффективная иммунизация цыплят трудно выполнима из-за взаимодействия трансовариальных антител с вакцинным вирусом, вследствие наличия материнского иммунитета у поголовья [77, 78,79].
Ньюкаслскую болезнь вызывает парамиксовирус первого серотипа (APMV-1) из -рода Rubulavirus, принадлежащий семейству Paramyxoviridae порядка Mononegavirales. Вспышки ньюкаслской болезни были впервые зарегистрированы у домашней птицы на острове Ява в Индонезии и Newcastle-upon-Tyne в 1926 году [68, 99].
Размер вирионов составляет от 120 до 300 нм [27, 28]. Вирус оболочечный, имеет геном из негативной однонитчатой РНК длиной 15156 оснований, который кодирует шесть белков: РНК-зависимую
РНК-полимеразу (Ь), белок гемагглютинина-нейраминидазы (НИ), белок слияния (Б), матриксный белок (М), фосфопротеин (Р) и нуклеопротеин (Т'О. Транскрипция происходит в направлении от 3'- к 5’- концу нуклеиновой кислоты с уменьшением количеств белка кодируемого каждым последующим геном. Репликация позитивной промежуточной РНК происходит при помощи вирусной РНК-зависимой РНК-полимеразы. Разрезание предшественника Бо на Р|- и Бг-продукты необходимо для диссеминации вируса в другие клетки. Б- и НК- поверхностные гликопротеиды - основные антигены, которые вызывают защитную иммунную реакцию [7, 36, 37].
Штаммы ВНБ характеризуются большой вариабельностью патогенности для цыплят, по этому признаку они сгруппированы в пять патотипов [34, 65]:
• висцеротропные велогенные - группа высокопатогенных штаммов, преимущественно вызывающих геморрагическое поражение кишечника;
• нейротропные велогенные - штаммы, вызывающие высокую смертность, с поражением респираторной и нервной систем;
• мезогенные - штаммы, вызывающие заболевание с преимущественным поражением дыхательной системы, но с низкой летальностью;
• лентогенные - штаммы, вызывающие слабую или субклиническую инфекцию верхних дыхательных путей;
• асимптоматические - штаммы, вызывающие субклиническую инфекцию желудочно-кишечного тракта.
Однако даже слабовирулентные штаммы могут вызывать тяжёлое заболевание, если инфекция обостряется условно-патогенной микрофлорой, другими инфекционными агентами или неблагоприятными условиями внешней среды.
Возбудитель НБ различается также и по тропизму. Выделяют вирусы, вызывающие нейротропную, пневмотропную и энтеротропную и смешанную формы течения болезни.
- Київ+380960830922