2
Оглавление:
Список сокращений................................................5
1. ВВЕДЕНИЕ..........................................................7
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.................................................13
2.1. Сибирская язва - распространение и вакцинопрофилактика 13
2.1.1. Культур&пьно-морфологические свойства возбудителя........13
2.1.2. Распространение болезни..................................13
2.1.3. Разработка и применение вакцин...........................16
2.2. Некробактериоз - распространение и вакцинопрофилактика 22
2.2.1. Культурально-морфологические свойства возбудителя........23
2.2.2. Распространение болезни..................................23
2.2.3. Разработка и применение вакцин...........................26
2.3. Разработка и применение ассоциированных и комплексных
вакцин в ветеринарной практике....................................39
2.3.1. Проблемы ассоциированной вакцинации......................39
2.3.2. Разработка ассоциированных и комплексных вакцин против бактериальных инфекций в ветеринарии........................44
2.4. Подбор производственных штаммов микроорганизмов и
требования к ним..................................................46
2.5. Заключение обзора литературы.................................49
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.........................................50
3.1. Материалы....................................................50
3.1.1. Штаммы микроорганизмов...................................50
3.1.2. Вакцины и антигены.......................................50
3.1.3. Питательные среды........................................50
3.1.4. Растворы и реактивы......................................50
3.1.5. Животные.................................................51
3.1.6. Оборудование.............................................51
3.2. Методы.......................................................52
3.2.1. Изучение культурально-морфологических свойств вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ возбудителя сибирской язвы...............52
3.2.2. Нейтрализация свободного и обратимо связанного формалина 54
3.2.3. Оценка реактогенности ассоциированных препаратов.........54
3.2.4. Изучение иммуногенности ассоциированного препарата.......54
3.2.5. Определение безвредности ассоциированного препарата......55
3.2.6. Серологические исследования..............................55
3.2.6.1. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)...............55
3.2.6.2. Реакция агглютинации (РА).............................55
3.2.7. Кожно-аллергическая проба (КАП)..........................55
з
3.2.8. Изучение полипептидного состава различных препаратов растворимых антигенов F.necrophorum..............................56
3.2.9. Изучение полипептидной специфичности антител методом иммуноблотинга...................................................56
3.2.10. Изготовление антигенного эритроцитарного диагностикума 56
3.2.11. Статистическая обработка результатов.......................56
3.3. Результаты собственных исследований.............................57
3.3.1. Разработка лабораторного образца вакцины для ассоциированной иммунизации против сибирской язвы и некробактериоза..................................................57
3.3.1.1. Изучение возможной конкуренции между антигенами ассоциированного препарата in vivo...........................57
3.3.1.2. Изучение иммунного ответа у лабораторных животных, привитых смесью коммерческих моновакцин......................58
3.3.1.3. Изучение совместимости вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ возбудителя сибирской язвы и инактивированной вакцины против некробактериоза in vitro......................60
3.3.1.4. Нейтрализация свободного и обратимо связанного формалина в комплексном некробактериозном антигене...........61
3.3.1.5. Влияние сроков и условий хранения ассоциированного препарата на жизнеспособность спор вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ.....................................................61
3.3.1.6. Испытание хлороформа и теотропина в качестве консервантов некробактериозного антигена.....................63
3.3.1.7. Определение оптимального соотношения сибиреязвенного и некробактериозного компонентов, а также иммунизирующей
дозы ассоциированного препарата..................................65
3.3.2. Изучение полипептидного состава и специфической активности растворимых антигенов F. necrophorum..................68
3.3.3. Разработка экспериментальной серии вакцины для ассоциированной иммунизации против сибирской язвы и некробактериоза....................................................73
3.3.3.1. Изготовление экспериментальной серии вакцины для ассоциированной иммунизации против сибирской язвы и
некробактери оза.................................................74
3.3.3.2 Изучение культурально-морфологических свойств вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ В. anthracis и массовой доли спор в ассоциированном препарате.................................75
3.3.3.3. Изучение безвредности вакцины для ассоциированной иммунизации против сибирской язвы и некробактериоза..........77
3.3.3.4. Изучение иммуногенности вакцины для ассоциированной иммунизации против сибирской язвы и некробактериоза..........78
12
Н.В. Греховой, изучение антигенной полноценности препаратов Р.песгорйогит проводилось совместно с к.б.н. Е.Г. Анохиной. Остальные этапы работы выполнены автором.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 123 страницах машинописного текста; включает введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложения.
Работа иллюстрирована 12 таблицами, 3 рисунками и дополнена приложениями. Список литературы включает 174 источника, из них зарубежных - 41.
13
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Сибирская язва - распространение и вакцинопрофилактика
Сибирская язва (Anthrax) - особо опасная инфекционная болезнь всех видов животных и человека, характеризующаяся острым течением, септицемией, интоксикацией и образованием карбункулов. Относится к почвенно-очаговым заболеваниям и носит стационарный характер. Б прошлом она наносила огромный ущерб животноводству и нередко вызывала массовое заболевание людей (С.Г. Колесов, 1976; И.А. Бакулов с соавт., 1996).
2.1.1. Культу рально-морфологические свойства возбудителя
Возбудитель сибирской язвы - Bacillus anthracis - неподвижная, грамположительная палочка шириной 1,0-1,2 мкм и длиной 3-5 мкм либо размером 1,0-1,3 на 3-10 мкм (Г.В. Дунаев, 1972; С.Г. Колесов, 1976). Возбудитель может существовать в трех формах: в виде вегетативных клеток разной величины, в виде спор, заключенных в хорошо выраженный экзоспориум, и в виде изолированных спор. В организме или при культивировании на специальных питательных средах бацилла образует капсулу, но есть штаммы, которые не образуют капсул. На плотных питательных средах микроб образует характерные колонии R-формы, на средах с пенициллином бациллы образуют сферонласты, так называемое «жемчужрюе ожерелье» (B.R. Chatterjll, R.P. Williams, 1965).
2.1.2. Распространение болезни
Сибирская язва как инфекционная болезнь животных известна человечеству с древних времен. Ее регистрировали во многих странах мира, особенно там, где географические, почвенные и температурные условия были благоприятны для сохранения и развития возбудителя во внешней среде. Распространению сибирской язвы способствовали развитие государств
- Київ+380960830922