2
ОГЛАВЛЕНИЕ СТР
1. ВВЕДЕНИЕ................................................. 4
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ......................................... 6
СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА
2.1 Реакция агглютинации (РА) ...... 6
2.2 Реакция связывания Комплеига (РСК, РДСК)............. 10
2.3 Кольцевая реакция с молоком (КР)..................... 13
2.4 Роз бенгал проба (РБП)............................... 15
2.5 Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).............. 16
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ................................ 28
3.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ...................... 28
3.2 ТЕХНОЛОГИЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ, КОНТРОЛЯ И СТАНДАРТИЗАЦИИ БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ РНГА....................................Л.... 32
3.2.1 Получение антигена из бруцелл........................ 32
3.2.2 Формалинизацияэритроцитов............................ 34
3.2.3 Сенсибилизация эритроцитов........................... 37
3.2.4 Определение оптимальных условий сенсибилизации эритроцитов 37
3.2.5 Изучение значения вида и штамма бруцелл для получения антигена............................................. 38
3.2.6 Изучение механизма действия детергента на бруцелл.....40
3.2.7 Стандартизация антигена.............................. 42
3.2.8 Изучение срока годности антигена..................... 47
3.3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЯ АНТИГЕНА БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ СЫВОРОТОК КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА................. 48
3.3.1 Изучение специфичности эритроцитарного антигена....... 48
3.3.2 ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РНГА ПРИ'БРУЦЕЛЛЕЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА........................... 56
1) Изучение чувствительности антигена для исследования в РНГА сывороток крови крупного рогатого скота, искусственно зараженного вирулентной культурой В. 57
2) Изучение чувствительности антигена для выявления естественно
з
инфицированного бруцеллезом крупного рогатого скота.62
3) Диагностические титры РНГА у крупного рогатого скота при бруцеллезе............................................86
4) Результаты исследований по изучению возможности использования РИГА для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота, иммунизированного и реиммунизированного вакциной из штам-ма-82.................................................91
5) Изучение диагностического значения РИГА для обнаружения бруцеллезных гемагглютинов в молоке укоров. 103
3.4 РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ АНТИГЕНА БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ В PH ГА СЫВОРОТОК КРОВИ ОВЕЦ................................ 104
3.4.1 Изучение специфичности антигена................. 104
3.4.2 Изучение чувствительности антигена для исследования в РНГА сывороток крови овец, искусственно зараженных вирулентными культурами В. 107
3.4.3 Результаты изучения чувствительности антигена для исследования в РНГА сывороток крови естественно инфицированных бруцеллезом овец и коз в неблагополучных хозяйствах 108
3.4.4 Диагностические титры РНГА при бруцеллезе овец.. 115
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ПРОИЗВОДСТВЕННОГО ИСПЫТАНИЯ АНТИГЕНА БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДЛЯ РНГА 123
5. РЕЗУЛЬТАТЫ КОМИССИОННОГО ИСПЫТАНИЯ АНТИГЕНА БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДЛЯ РНГА............. 124
6. РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА В СРАВНЕНИИ С МЕДИЦИНСКИМ ДИАГНОСТИКУМОМ ДЛЯ РНГА...................................................131
7. ИСПЫТАНИЕ ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА В РНАт иРТНГА.......................:................... 134
8. ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ РНГА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ................. 140
9. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.......................................... 142
10. ВЫВОДЫ.............................................. 150
12. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ............................ 152
13. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.................... 153
14. ПРИЛОЖЕНИЯ.......................................... 199
27
Теоритическая и практическая значимость. Результаты проведенных исследований дополняют новыми научными фактами проблему диагностики бруцеллеза. Они могут быть использованы при изучении патогенеза и иммуногенеза бруцеллеза, а также в научных исследованиях, направленных по профилактике и ликвидации этой болезни.
На основании результатов исследований разработаны:
“Временное наставление по применению антигена бруцеллезного эритроцитарного для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) в порядке широкого производственного испытания”, утвержденное Департаментом ветеринарии Минсельсхозпрода России (2.09.98.г., №13-7-2/1380).”
“Инструкция по изготовлению и контроля антигена бруцеллезного эритроцитарного для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА)”, утвержденная директором ВГНКИ (24.08.98г.)
Технические условия “Антиген бруцеллезный эритроцитарный для реакции непрямой гемагглютинации (РИГА),” согласованные Департаментом ветеринарии и утвержденные директором ВГНКИ (24.08.98.г.)
Антиген бруцеллезный эритроцитарный для РНГА Ветфармбиосоветом Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ рекомендован в поряде широкого производственного испытания.
Рекомендации “Мероприятия по профилактике и ликвидации бруцеллеза крупного рогатого скота в Дагестане “ (одобрены НТС МСХ Республики Дагестан, 18.04.84г.)”
Методические рекомендации “По тактике эпизотолого-эпидемиологического обследования очага бруцеллезной инфекции, планированию и организации мероприятий по профилактике бруцеллеза и оздоровлению неблагополучных хозяйств в Республике Дагестан "(утвреждение Постановление Центра госсанэпидназора в РД и Комитетом Правительства в РД по ветеринарии от 10.09.98г. №11/3). Махачкала, 1998г.
Апробация. Основные материалы диссертации доложены и одобрены на научно-производственной конференции “Основные проблемы ветеринарии Северного Кавказа” (Махачкала, 16-17 сентября 1976г.), на заседании методического Совета по бактериальным инфекциям и препаратам ВГНКИ (Москва, 13 апреля 1976г.), на восьмой Всесоюзной конференции по лептоспирозам (Тбилиси, 1983г.), на научно-практической конференции, посвященная 60-летию кафедры инфекционных болезней с эпидемиологией (Махачкала, 1 июня, 1996г.), на республиканской научно-практической конференции “Состояние и перспективы развития животноводства в Дагестане” (Махачкала, 29-30 октября 1996г.), на заседании секции Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (Москва, июнь 1997г.), на международной конференции, посвященный 30-летию Прикаспийчкого ЗНИВИ “Современное состояние и перспекивы интеграции ветеринарной науки пратики в условиях
28
реформирования сельскохозяйственного производства Прикаспийского ЗНИВИ (Махачкала, 9-11 сентября 19У7г.), на заседание Совета по ветеринарным препаратам (ветфармбиосвете, Москва, 18 июня 1998г.).
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликованы 39 научных работ в сборниках научных трудов Прикаспийского, Северо-Кавказкого ЗНИВИ, ВГНКИ, журнал “Ветеринария”, материалах Международным, Всесоюзных и Республиканских научных и научно-производственных конференций и других научно-производственных изданиях. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на страницах машинописного текста, содержит 93 таблиц и одна фотография. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, 27 разделов и подразделов, результатов экспериментальных и производственных исследований, заключение, выводы, практических предложений, списка литературы, включающего 423 источников, в том числе 99 зарубежных.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Работа выполнена в 1971-199Угг. в лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики бруцеллеза и туберкулеза сельхозживотных Прикаспийского зонального научно-исследовательского ветеринарного института, во Всероссийском государственном научно- исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов, ветеринарных лабораториях и хозяйствах республик - Дагестана, Северной Осетии, Кабардино-Балкарии и Волгоградской области.
Апробацию эритроцитарного антигена для РНГА и производственное испытание его проводили комиссионно в установленном порядке при участии сотрудников ВГНКИ, ЦВЛ, Республиканской ветеринарных специалистов научных и практических учреждений по программам, с разрешения ГУВ МСХ СССР, Департамента ветеринарии Минсельхозпрода РФ при непосредственном участии авторов. Основная часть работы, связанная с разработкой, испытанием антигена для РИГА при бруцеллезе животных, обобщение и анализ полученных результатов исследований проведены автором самостоятельно.
В разработке нормативной документации принимали участие сотрудники Прикаспийского зонального НИВИ, ВГНКИ и ВНИИБТЖ.
Антиген для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) готовили но методике, разработанной совместно с ВГНКИ.
С этой целью определения наиболее оптимального режима формалинизации эритроцитов были использованы способы предложенные М.И. Леви с соавт. (1962),
H.A. Краскиной с соавт (1965), R.Weinbach (1958), В нашей модификации.При этом
- Київ+380960830922