2
СОДЕРЖАНИЕ
Стр.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.................................. 8
ВВЕДЕНИЕ.......................................... 10
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.................................. 18
1.1. Характеристика инфекционного ринотрахеита -пустулезного вульвовагинита крупного рогатого
скота............................................. 18
1.2. Латентная форма инфекционного ринотрахеита
крупного рогатого скота, ее влияние на диагностику, специфическую профилактику заболевания и эпизоотологическое значение....................... 25
1.3. Роль быков-производителей в эпизоотологии ин-
фекционного ринотрахеита крупного рогатого скота ............................................... 32
1.4. Свойства генома вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и перекрестные
связи с родственными вирусами..................... 41
1.4.1. Изучение перекрёстных связей с родственными
вирусами.......................................... 45
1.5. Конструирование молекулярных зондов для выяв-
ления нуклеотидных последовательностей вируса инфекционного ринотрахеита и их применение для диагностики заболевания........................... 51
1.6. Меры профилактики и борьбы с инфекционным
ринотрахеитом крупного рогатого скота............. 65
1.7. Заключение........................................ 76
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Материалы и методы................................ 80
з
2.1. Изучение роли вируса инфекционного ринотра-
хеита крупного рогатого скота в этиологии массовых вспышек респираторных и гинекологических заболеваний животных................................ 86
2.1.1. Выделение вируса инфекционного ринотрахеита
крупного рогатого скота в перевиваемой линии культуры клеток МОВК................................ 97
2.2. Конструирование молекулярных зондов для выяв-
ления ДНК вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.................... 100
2.2.1. Отработка параметров культивирования и накоп-
ления вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота................................ 100
2.2.2. Концентрирование вируссодержащей суспензии ... 104
2.2.3. Очистка вируссодержащей суспензии................... 105
2.2.4. Выделение ДНК из полученных препаратов
вируса............................................. 105
2.2.5. Рестрикционный анализ выделенных образцов
ДНК вируса.................................... 106
2.3. Клонирование фрагментов ДНК вируса в плазмид-
ном векторе................................... 109
2.3.1. Отбор плазмид, содержащих вставки генома вируса ....................................................
2.3.1.1. Определение чувствительности и специфичности плазмидного зонда для выявления ДНК вируса в радиоактивном варианте...................................
34
занесённой втиранием (R.A. Huck et al., 1971; R. Kokles, 1971; 1972; B.E. Shefly et al., 1974). По-видимому, имеет место и то и другое. Некоторые авторы указывают, что эпителий в дистальной части уретры может изменяться и продуцировать вирус (H. Köhler et al., 1972; F. Steck et al., 1976).
J.T. van Oirshot (1995a) установил, что плазма семенной жидкости гораздо чаще содержала вирус, чем сами спермин.
Исследования последних лет указывают на то, что вероятнее всего сперму контаминирует латентный вирус во время своей реэкскреции из сакрального ганглия, т.к. известно, что реэкскреция вируса всегда происходит в первично инфицированный орган (Р.-Р. Pastoret et al., 1982; 1985; М. Ackerman et al., 1984; G. Kutish et al., 1990; F.A. van Engelenburg et al., 1995; A. Ilos-sain et al., 1995; J.A. Galeota ct al., 1997).
Большой интерес представляет также, частота выделения вируса со спермой в течение жизни от быков-производителей, имеющих и не имеющих антитела к вирусу.
F. Ulbrich et al. (1974, 1975) исследовали 1211 проб спермы от 10 быков с латентным течением болезни. Вирус выделили от 4 животных в 8 случаях.
J. Luttig et al. (1976) исследовали 1445 проб спермы, полученной от 38 животных. Вирус удалось изолировать от 33 из низ в 59 пробах.
М. Goffaux (1976) подвергли вирусологическим исследованиям 1233 пробы спермы от 94 быков. Вирус изолировали от 35 животных в 113 пробах. Аналогичные результаты получили О.С. Stroub et al. (1977) при исследовании 96 проб, полученных от 24 животных. Вирус выделили 4 раза от 4 быков.
Представленные данные свидетельствуют о том, что выделение вируса со спермой носит перемежающийся характер. Авторам удалось доказать также, что в отдельных сериях в разное время количество вируса ИРТ КРС может быть различным. Кроме того, титры вируса быстро понижались после изъятия спермы из азота, а также хранения при - 20°С (T.W. Drew et al.,
35
1987). По видимому, здесь играет роль содержание антител в семенной жидкости (Kh. Kharlambiev et al., 1974).
С этими положениями согласуются сообщения J.T. van Oirschot (1993, 1995b), который считает, что после первичной острой фаза инфекции вирус остаётся латентным в сакральном ганглии и периодически выделяется в спермы. Выделение это носит перемежающийся характер, причём у каждого быка индивидуально. Автор изучал частоту выделения вируса из спермы 116 быков на станции искусственного осеменения. Вирус изолировали от 43 быков, у 27 из них он выделялся со спермой в течение более 10 дней постоянно, а у 16 - периодически.
Даже незначительная контаминация спермы быка вирусом ИРТ КРС после осеменения ею телок приводила к развитию патологических изменений в их репродуктивном тракте и сероконверсии (R.D. Shchults et al., 1980).
I.M. Parsonson, W.A. Snowdon (1975) изучали влияние естественного и искусственного осеменения на развитие клинических признаков у коров и телок. Животным первой группы вводили семя, контаминированное вирусом ИРТ-ИПВ. Телок и коров второй группы осеменяли быками, имеющими признаки баланопоститов. Животным третьей группы вводили культуральную жидкость. В результате опыта у животных первой и второй групп развились клинические признаки вульвовагинита. Авторы делают заключение о том, что сперма инфицированных вирусом ИРТ КРС быков является фактором распространения вируса.
R. Rowe (1978) сообщает о причинах абортов у молочного скота в штате Висконсин (США). Вирусологически исследовали абортированные плоды, ткани плаценты (475 проб) и 1288 проб сыворотки крови абортировавших коров. В результате вирус выделили в культуре клеток в из 13,5% исследованных проб, а антитела обнаружили в 13,9% проб сыворотки крови. Автор высказавает предположение, что приблизительно в 10% случаев аборты были вызваны осеменением животных контаминированной
- Київ+380960830922