2
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ....................................................... 4
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ...............,...............................8
1.1. Современные представления о строении
микобактерий туберкулеза.................................8
1.2. Бактериологическая диагностика туберкулеза..............9
1.3. Методы обработки биологического материала для выделения микобактерий туберкулеза..........................11
1.4. Питательные среды для культивирования
микобактерий туберкулеза................................13
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ......................................26
2.1. Материалы и методы.....................................26
2.2. Результаты исследований................................31
2.2.1. Приготовление питательных сред с использованием биологических добавок и минерального комплекса..............31
2.2.1.1. Среды с использованием дрожжевой суспензии.........31
2.2.1.2. Среды с использованием оксидата торфа..............32
2.2.1.3. Среды с использованием вытяжек из золы
древесины березы......................................34
2.2.1.4. Среды с использованием соевого молока,
оксидата торфа и вытяжек из золы древесины березы 37
2.2.1.5. Среды с использованием вытяжек из
золы древесины березы и оксидата торфа................39
2.2.2. Изучение скорости роста различных видов микобактерий
на коммерческих и опытных питательных средах...........41
2.2.2.1. Скорость и интенсивность роста M.bovis (шт. 8, ВИЭВ)
на различных питательных средах.......................42
2.2.2.2. Скорость и интенсивность роста М.tuberculosis (шт. H37Rv) на различных питательных средах..............................51
2.2.2.3. Скорость и интенсивность роста М.avium (шт. 780, ВИЭВ)
на различных питательных средах..................62
2.2.2.4. Скорость и интенсивность роста М^т^табэ (культура ГНУ ИЭВСиДВ) на различных питательных средах.....................................69
2.2.3. Изменение ростовых свойств питательных сред (опытных и коммерческих) при различных сроках
и условиях их хранения.......................... 70
2.2.4. Сравнительный анализ диагностической ценности питательной среды ИЭВСиДВ и коммерческих сред при посеве биоматериала лабораторных животных, зараженных патогенными микобактериями туберкулеза 79
2.2.5. Диагностическая эффективность плотных питательных сред при изоляции микобактерий из биоматериала больных туберкулезом сельскохозяйственных животных.........................82
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.....................87
4. ВЫВОДЫ..................................................95
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ................................97
6. ЛИТЕРАТУРА............................................ 98
7. ПРИЛОЖЕНИЕ.............................................113
значительно упрощен и получил признание в модификации Гона-Левенштейна(О.Р. Драбкина, 1963).
Получение чистых культур микобактерий из биологического материала имеет ряд трудностей. Поэтому очень важно подобрать такой способ подавления сопутствующей микрофлоры в биологическом материале перед посевом, который был бы щадящим для выращивания микобактерий, то есть не угнетал их жизнеспособность. Вследствие этого для обработки биологического материала необходимо использовать такие вещества и в таких концентрациях, которые оказывали бы минимальное избирательное, повреждающее действие на микобактерии и максимальное уничтожающее - на сопутствующую микрофлору. К таким веществам относятся 3-6%-ные растворы серной кислоты, 5-15%-ные растворы соляной и щавелевой кислот и 4%-ный раствор едкого натра (В.В. Кузьмин, М.Ф. Иванчиков, 1953; А.П. Аликаева, 1979; Ю.Я. Кассич, 1990).
Анализируя литературные данные, касающиеся различных методов предварительной обработки исследуемого биологического материала на туберкулез, становится ясным, что сведения о сравнительной ценности применяемых химических веществ довольно разноречивы.
На основании исследований В.Е. Косенко и др. (1987), В.Е. Щуревского и др. (1987) было установлено, что возбудители туберкулеза бычьего и человеческого видов устойчивы к воздействию 5-15-20%-ных концентраций серной, соляной и щавелевой кислот, при экспозиции 2 и 2,5 часа. Однако интенсивность роста культур снижается при обработке биологического материала (кусочки органов, лимфатические узлы) 5-10%-ными растворами серной кислоты при экспозиции 20-40 минут. Рост данных культур микобактерий при этом отмечен в пределах 32-38,4%. Ю.Я. Кассич и др.(1990) рекомендовали для использования в лабораторной практике 2-4%-ные растворы едкого натра.
Н.М. Тажгалиев (1983) предлагал после обработки биологического материала кислотами и щелочами двух-трехкратное промывание его физиологическим раствором.
Для концентрирования микобактерий туберкулеза применяют метод флотации или центрифугирования, который основан на адсорбции углеводородами (ксилолом, бензином) микобактерий туберкулеза и всплывании последних вместе с ними. Этот метод чаще используют при исследовании молока, мокроты и другого биологического материала (П.А. Емельяненко и др., 1982).
Для предпосевной обработки биологического материала также можно эффективно использовать 1%-ные растворы этония и катамина, 0,05-0,1%-ные растворы хлоргексидинбиглюконата (К.А. Тургенбаев, 1991).
В.Д. Свиридов (1996), для повышения результативности бактериологической диагностики туберкулеза, предлагал обрабатывать биологический материал способом, исключающим вредное влияние каких-либо агрессивных химических веществ при выделении микобактерий, используя гомогенизирование биоматериала с добавлением раствора «Одессоль», в основу которого входит неионогенное поверхностно-активное вещество.
В ветеринарии общепринятыми способами обработки биологического материала являются методы Гона и А.П. Аликаевой (ГОСТ 26072 - 89, СТ СЭВ 3457 - 81).
1.4. Питательные среды для культивирования микобактерий
туберкулеза
Первые искусственные питательные среды для культивирования микобактерий, дрожжей и грибов были разработаны Луи Пастером в 1859-1864 годах. Они включали в себя источники углерода (органические кислоты, спирт или сахара), аммонийные соли и необходимые зольные элементы. Одной из первых основных, питательных сред для выращивания бактерий явился мясо-пептонный бульон (Н.Д. Иерусалимский, 1949, 1963). В результате разработки питательных сред для выращивания культур и бактерий и их окраски оказалось возможным открытие Р. Кохом в 1882 году возбудителя туберкулеза (ЮЛ. Кассич и др., 1990; S.U. Bridson, 1996).
- Київ+380960830922