ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исходя из цели и задач работы, настоящее исследование включило два основных
аспекта: экспериментальный и клинический.
2.1. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
Основной задачей экспериментального фрагмента явилось изучение морфологических особенностей течения репаративных процессов в слизистой оболочке рта в условиях местного лечебного воздействия смеси восков крымской розы, лаванды и шалфея. Работа проводилась на базе вивария Крымского государственного медицинского университета им. С.И. Георгиевского в соответствии с приказом МЗ СССР № 755 от 12.08.77г. и с дополнением к этому приказу (№ 701 от 27.07.78).
Для решения задач, поставленных в работе, выполнены опыты на 32 беспородных собаках обоего пола, весом от 18 до 24 кг. Животные были распределены на три группы:
Таблица 2.1.1.
Распределение экспериментальных животных по группам и срокам наблюдения.
Группы
Вид повязки Сроки наблюдений
3 сут. 7 сут. 18 сут. 21 сут. Всего животных: 1
опытнаяСмесь восков лаванды + шалфея 3 3 3 3 12 2
опытнаяСмесь восков крымской розы, лаванды и шалфея 3 3 3 3 12 3
контрольНастойка календулы 2 2 2 2 8Итого 8 8 8 8 32
1. Опытная группа, с применением смеси восков лаванды и шалфея.
2. Опытная группа, с использованием смеси восков крымской розы, лаванды и шалфея.
3. Контрольная группа, с применением спиртовой настойки календулы [48].
Сведения о распределении экспериментальных животных по сериям опытов представлены в таблице 2.1.1.
За день до операции животным прекращали выдачу пищи, измеряли вес. С целью обезболивания проводили внутрибрюшную инъекцию этаминала натрия из расчета 30-50 мг на 1 кг веса.
Животным первой группы по переходной складке преддверия рта вдоль тела нижней челюсти скальпелем формировали линейную рану длиной 4 см и глубиной 0,5 см. При этом рассекали СОР, подслизистый слой и надкостницу нижней челюсти, фиссурным бором трепанировали наружную стенку зубной альвеолы, осуществляли гемостаз (с помощью 2-3 минутного давления тампона на кровоточащие ткани). Края раны сопоставляли и накладывали узловые швы кетгутом 4/0. Затем, между концами шовных нитей на линию швов укладывали пластинку (4 х 0,5 х 0,2 см), изготовленную из смеси восков лаванды (50%) и шалфея (50%), над которой, с целью фиксации пластинки, завязывали концы шовных нитей (рис. 2.1). Композиция воска лаванды и шалфея выбрана нами с учетом избирательной антимикробной и антигрибковой активности компонентов, взаимно дополняющих свойства друг друга [131].
Рис. 2.1. Схема расположения восковой пластины на ране.
Животным второй группы проводили аналогичную операцию, но на линию швов укладывали пластинку, выполненную из смеси восков: крымской розы (40%), лаванды (30%), шалфея (30%).
Животным третьей (контрольной) группы рану моделировали по такой же технологии, на края раны накладывали узловые швы кетгутом. Линии швов ежедневно однократно обрабатывали настойкой календулы [48].
Послеоперационный период протекал без осложнений.
Собак выводили из опыта на 3, 7, 14, 21 сутки передозировкой наркоза этаминалом натрия. Для гистологического изучения скальпелем брали участок оперированных тканей размером 2х1х1 см.
Полученный материал фиксировали в 10% нейтральном формалине, с последующей проводкой в батарее спиртов возрастающей концентрации, заключали в парафин. Готовили серийные срезы толщиной 5 - 7 мкм. Для обзорной микроскопии применяли окраску гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван - Гизон. Срезы просматривали и фотографировали в микроскопе МБИ -15 -2.
С помощью общепринятого электронно-микроскопического метода исследовали участки травмированной слизистой оболочки, взятые сразу после забоя животного из фрагмента, предназначенного для гистологического исследования. Вырезали 3 - 4 фрагмента ткани размером 1х1х1 мм. Фиксацию материала осуществляли в 2,5% растворе глютарового альдегида на фосфатном буфере (рН = 7,2 - 7,4) в течение 45 - 50 минут, на холоде, при температуре - 40?С. Затем, ткань отмывали от фиксатора 0,1 М фосфатным буфером три раза по 10, 20 и 30 минут. После этого, кусочки фиксировали в течение 1 часа 1% раствором четырехокиси осмия (ОsО4) на фосфатном буфере. Далее осуществляли проводку материала в спиртах восходящих концентраций (25%, 30%, 50%) по 5 и 10 минут. В 70% спирте кусочки, как правило, держали 2 часа, лишь при необходимости оставляли на ночь. В 96% и 100% спиртах материал обезвоживали 2 раза по 25 минут. Затем осуществляли промывку материала ацетоном 2 раза по 25 минут и оставляли в смеси ацетон - смола в равной пропорции на 1 час с закрытыми пробками и на 1 час с открытыми пробками или на ночь с закрытыми. Заливку материала проводили с использованием следующего состава: смесь А + смесь В по 2,5 мл + ДМР - 30 из расчета 0,15 мл (4 капли) на 5 мл смеси.
Смесь А Эпон - 812 - 62мл ДДСА - 100мл.
Смесь В Эпон - 812 - 100 мл МНА - 89 мл.
Полимеризацию осуществляли в термостате при температуре 37?С (ночь), 45?С (день), 56?С (ночь).
Ультратонкие срезы, изготовленные на ультрамикротоме (Швеция), окрашивали цитратом свинца по Рейнольдсу и, при необходимости, уранилацетатом. Сеточки просматривали на электронном микроскопе УЭМВ - 100 К.
2.2. КЛИНИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ.
Клиническая часть работы построена на материале, полученном в ходе изучения результатов лечения и послеоперационного наблюдения за больными обоего пола в возрасте от 15 до 50 лет, находившихся на лечении в отделении челюстно-лицевой хирургии Крымской республиканской клиническ