РОЗДІЛ 2
ЗАГАЛЬНА МЕТОДИКА І ОСНОВНІ МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
Репрезентовані в роботі дані одержані на експериментальному матеріалі. Експериментальні дослідження проводили, використовуючи лінійних тварин: щурів лінії Вістар, мишей ліній C57Bl та CC57W. Досліджували клітини тимусу, селезінки, периферичних лімфатичних вузлів, перитонеальні макрофаги та оцінювали перебіг модельних пухлинних процесів.
Детальні характеристики експериментальних тварин наведені у відповідних підрозділах.
Загальні відомості про характер та кількість досліджень, а також про використані методи містяться в таблиці 2.1.
2.1. Експериментальні тварини
В дослідженнях використані лінійні тварини:
- щури Вістар одержані з розплідника Інституту ендокринології і обміну речовин АМН України; самці, віком 6, 10 та 18 міс, вагою 250-450 г.
- миші лінії C57Bl одержані з розплідника віварію ІЕПОР НАН України; самці та самки (F1-F2), віком 2,5-3,5 міс та самці (F0) віком 13 міс; вага 18-20 г та 25-30 г відповідно.
- миші лінії СС57W одержані з розплідника НДП "Биомодель" АМН СРСР (Московська обл., Росія); самці та самки (F2), віком 2,5-3,5 міс; вага 18-20 г.
Характеристика ліній [83]:
Таблиця 2.1.
Характер та об`єм досліджень, що проведені під час виконання роботи
Характер дослідженьВикористано в експерименті тварин лінії (шт)Застосовані методики123Вивчення впливу малих доз іонізуючої радіації на протипухлинну резистентність тривало опромінюваних тварин
(термін опромінення 3,5 міс)C57Bl F0 - 31Визначення відносної маси та клітинності тимусу, селезінки та периферичних лімфовузлів
Визначення кількості перитонеальних МФ та їх активності в НСТ-тесті.
Вивчення реакції лімфоцитів на мітогени (РБТЛ)
Визначення активності ПКК (в цитотоксичному тесті in vitro, клітини-мішені - К-562)
Дослідження росту і метастазування меланоми В16Вивчення впливу малих доз іонізуючого випромінювання на імунний статус та чутливість до пухлинного росту тварин F2 популяції мишей, яка постійно утримувалася в зоні відчуження ЧАЕСC57Bl F2 - 801
CC57W F2 - 802Визначення відносної маси та клітинності тимусу, селезінки та периферичних лімфовузлів1,2
Визначення субпопуляційного складу (Т-, В-лімфоцити, бласти і великі лімфоцити) та проліферативної активності нестимульованих лімфоцитів з периферичних лімфовузлів1,2
Вивчення реакції на мітогени (РБТЛ) 1,2
Вивчення реакції "трансплантат проти хазяїна" (РТПХ) 1,2
Визначення активності ПКК (в цитотоксичному тесті in vitro, клітини-мішені - К-562) 1,2
Визначення кількості перитонеальних МФ та їх активності в НСТ-тесті1
Дослідження росту і метастазування карциноми Льюїс1 та пухлин, індукованих 20-МХ2
Продовження табл. 2.1.123Вивчення протипухлинної резистентності у нащадків опромінених в зоні відчуження ЧАЕС (протягом 3,5 міс) самцівC57Bl F1 - 703
C57Bl F2 - 804
Визначення відносної маси та клітинності тимусу, селезінки та периферичних лімфовузлів3,4
Визначення проліферативної активності нестимульованих лімфоцитів з периферичних лімфовузлів3,4
Вивчення реакції на мітогени (РБТЛ) 3,4
Визначення кількості перитонеальних МФ та їх активності в НСТ-тесті3,4
Визначення активності ПКК (в цитотоксичному тесті in vitro, клітини-мішені - К-562) 3,4
Вивчення антигенспецифічної пухлино асоційованої імуносупресії (РБТЛ in vitro)3
Визначення активності цитотоксичних Т-лімфоцитів (в цитотоксичному тесті in vitro, клітини-мішені - клітини меланоми В-16 або карциноми Льюїс)4
Вивчення спонтанної антигеннеспецифічної супресорної активності лімфоцитів4
Визначення функціональної активності МФ (за здатністю продукувати ФНП та ІЛ-1)4
Визначення функціональної активності Т-лімфоцитів селезінки за здатністю продукувати ІЛ-24
Дослідження росту і метастазування меланоми В-163,4 та карциноми Льюїс4Вивчення динаміки змін протипухлинної резистентності при постійному опроміненні в зоні відчуження ЧАЕСщури Вістар - 120Визначення відносної маси та клітинності тимусу, селезінки та периферичних лімфовузлів
Визначення проліферативної активності нестимульованих лімфоцитів з периферичних лімфовузлів
Визначення активності ПКК (в цитотоксичному тесті in vitro, клітини-мішені - К-562)
Продовження табл. 2.1.123(термін опромінення 4, 8 та 16 міс)Визначення активності перитонеальних МФ в НСТ тесті
Дослідження росту і метастазування карциноми пухлин, індукованих введенням трансформованих клітин А5
Примітки:
1. 1 - в дослідженнях використовували мишей C57Bl - F2 популяції, яка постійно утримувалася в зоні відчуження ЧАЕС;
2. 2 - в дослідженнях використовували мишей CC57W - F2 популяції, яка постійно утримувалася в зоні відчуження ЧАЕС;
3. 3 - в дослідженнях використовували нащадків F1 опромінених в зоні відчуження ЧАЕС самців C57Bl
4. 4 - в дослідженнях використовували нащадків F2 опромінених в зоні відчуження ЧАЕС самців C57Bl
а) миші лінії C57Bl (H-2b) - не мають "фактора молока". Частота спонтанних пухлин легень не перевищує 1 %, частота спонтанних пухлин інших локалізацій теж низька.
б) миші лінії СС57W (H-2b) - не містять "фактора молока", але сприйнятливі до його розмноження. Пухлини легень виникають у 25%, частота спонтанних пухлин інших локалізацій низька (не перевищує 1%).
в) щури Вістар - особливістю цієї лінії є високий рівень продукції клітинами селезінки супресорного фактора, який суттєво зменшує відповідь лімфоцитів на ІЛ-2, і внаслідок цього зменшується індукція ЛАК-клітин [221].
2.2. Моделі пухлинного росту
2.2.1. Епідермоїдна метастазуюча карцинома легенів Льюїс [149]. Підтримується пасажами на мишах С57Bl. Пухлини індукували введенням по 1,5 х 105 клітин на мишу в стопу в об`ємі 0,05 мл. Строк спостереження за тваринами складав 80 діб.
2.2.2. Метастазуюча меланома мишей В-16. [149]. Підтримується пасажами на мишах C57Bl. Пухлини індукували введенням клітин меланоми внутрішньом'язево в дозі 3х105 клітин/мишу. Спостереження за тваринами тривало 70 діб.