РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
2.1. Характеристика використаного матеріалу та групування експериментів
Експерименти проведені на 105 кроликах-самцях лінії Шиншила, масою 1750-2250г. Всіх тварин, до введення в експеримент, помістили в умовах віварію по одному в клітці. Раціон харчування включав усі необхідні компоненти [108]. Характеристика експериментальних груп тварин представлена в табл. 2.1.
Експериментальну модель токсичної дії фторидів відтворювали щоденним введенням кроликам NaF per os у дозі 0,025 г/кг маси тіла у вигляді 1%-ного водного розчину, на протязі 50 днів. Використана доза NaF і тривалість хронічного експерименту дозволяють змоделювати метаболічні порушення характерні для фторид-іона [60]. Доза NaF відпрацьована в лабораторії біохімії і фармакології антиоксидантів Української медичної стоматологічної академії [20,104, 200, 201, 202] і становить 1/8 від ЛД50 [108]. Склад композиції та використані дози АО обумовлені системністю біологічного інгібування ВРПО ліпідів і відображає антирадикальний ланцюг САЗ [136, 152]. Перелік і умови застосування досліджених препаратів представлені в табл. 2.1.
2.2. Характеристика обстеженого контингенту робітників, що контактують із фторидами
Обстежено 164 робітники, що контактують із фтористими сполуками і не мають хронічних захворювань які впливають на функціональний стан організму. Всі обстежені постійно знаходилися в контакті з фтормісткими сполуками, що перевищують гранично допустимі концентрації. Як контрольну групу, обстежено 31 чоловік, що за виробничої діяльності не контактують із фторидами
.
Таблиця 2.1
Групування експериментів на кроликах
Експериментальна
групаКількість кроликів
в експериментіВведення
фториду
натріюВведення
фармакологічних препаратівЧас (днів)на
початкуу
кінціІнтактні2929---
Отримували
фторид натрію30240,025 г/кг
маси -50Отримували
фторид натрію
і пектин13110,025 г/кг
маси Пектин
(0,3 г/кг маси)50Отримували
фторид натрію
і комплекс АО18150,025 г/кг
маси Комплекс АО:
?-токоферолу-ацетат (0,01 г/кг маси);
кверцетин ( 0,02 г/кг маси);
аскорбінова кислота (0,02 г/кг маси)50Отримували
фторид натрію
і пектин та комплекс АО15150,025 г/кг
маси Пектин (0,3 г/кг маси) і Комплекс АО:
?-токоферолу-ацетат (0,01 г/кг маси);
кверцетин ( 0,02 г/кг маси);
аскорбінова кислота (0,02 г/кг маси)50
Розподіл обстежених робітників за стажем роботи і віком представлені в табл. 2.2, 2.3. Всі обстежені склали рівні вікові групи. За стажем роботи групи кількісно відрізняються між собою. Робітники основної групи за статтю і віком відповідають таким у обстежених осіб контрольної групи.
Таблиця 2.2
Розподіл робітників, що контактують із фторидами,
у залежності від віку
ГрупиВік20-29 років30-39 років40-55 роківКонтрольна група101011Контактують з фторидами353732Стаж у роках М±m5,23±1,04,12±0,56,26±0,7
Таблиця 2.3
Розподіл робітників, що контактують із фторидами
у залежності від стажу роботи
ГрупиСтаж роботидо 2 років2-4 роки4-6 років6-9 роківКількість робітників20301935Вік у роках М±m28,3±0,7332,6±0,3739,4±1,0437,8±0,4
Частина робітників, віком 30-39 років, що контактують на виробництві з фторидами, протягом 6 місяців одержували пектин, препарати АО і їхню комбінацію. Групування спостережень по оцінці профілактичної дії використаних препаратів представлені в табл. 2.4.
2.3. Біохімічні методи дослідження
Для проведення біохімічних досліджень використовували слідуючу апаратуру й обладнання: фотометр лабораторний ЛМФ - 72М; іонометр універсальний ЭВ-74; спектрофотометр СФ-26 (ЛОМО, Росія); фотоелектрокалориметр ФЭК-56-М; центрифуга ОПН-3; центрифуга К-70 (Німеччина); ваги торсіонні WT; ваги аналітичні ВЛР-200 г та інше лабораторне обладнання.
Таблиця 2.4
Групування спостережень на робітниках, що контактують із фторидами,
і отримували лікарські препарати
Група
обстежених Кількість обстеженихТривалість спостережень
(міс) ВсьогоЗа віком20-2930-3940-45Контрольна31101011-Контактують з фторидами 1043537326 Контактують з фторидами і отримували пектин22-22-6 Контактують з фторидами і
отримували
препарати АО18-18-6 Контактуть з фторидами і отримували пектин та
препарати АО20-20-6
На 50-й день досліду в крові і тканинах експериментальних тварин визначали біохімічні показники, що відображають стан ліпідного і перекисного обмінів, рівень антиоксидантної забезпеченості організму, активність АФ, вміст МЕ. Перелік біохімічних методів, а також літературні джерела представлені в табл. 2.5.
Таблиця 2.5
Біохімічні методи дослідження
ПоказникТканинаЛітератураЗагальний холестеринсироватка"Биотест" Lachema, ЧехияЗагальні ліпідисироватка"Биотест" Lachema, Чехия?- і пре-?-ЛПсироваткаА.Н.Климов и соавт., [93]АцилгідроперекисисироваткаО.Н.Воскресенский, В.А.Туманов [46] ТБК-реактантисироватка,
печінка,
міокард"Биоконт ТБК" , Россия
[46]СГЕкровW.А.Pryor, [286]Аскорбінова кислота (окислена та відновлена форма)печінка,
міокардВ.В.Соколовский и соавт., [176]СОДкров, печінка,
міокардО.С.Брусов и соавт., [26]КаталазакровН.Н.Пушкина, [166]КальційсироваткаГ.А.Смирнова, Н.П.Иванов, [173]ЗалізосироваткаГ.А.Смирнова, Н.П.Иванов, [173]МагнійсироваткаГ.А.Смирнова, Н.П.Иванов, [173]Фосфор неорганічнийсироваткаО.Г.Архипова, [131]ФторсечаЛ.А.Голованова [58]
У кроликів, під гексеналовим наркозом (50 мг/кг маси), розкривали грудну клітку і через силіконовану голку з порожнини лівого шлуночка робили забір крові. Біохімічні визначення проводили, як правило, у двох паралельних пробах. Одночасно відбирали зразки досліджуваних тканин (міокард, печінка), які швидко поміщали в морозильну камеру.
У сироватці крові досліджували вміст загального холестерину та загальних ліпідів за допомогою наборів "Біотест" фірми Lасhема (Чехія), а