Розділ 2. Матеріали та методи досліджень.
2.1. Умови та місце проведення досліджень.
Експериментальна частина роботи виконана в науково-впроваджувальному центрі обласної державної лабораторії ветеринарної медицини м. Луганська, відділі патоморфології Інституту експериментальної і клінічної ветеринарної медицини м. Харків, інституті кріобіології м. Харків, в птахогосподарствах Луганської області по завданню 0197,У000760 - "Розробити ефективну систему діагностики, терапії і профілактики інфекційних захворювань птиці" в період з 1999 по 2001 роки.
Дослідження проводили з метою вивчення: епізоотичної ситуації щодо ІБК в птахогосподарствах із різною спеціалізацією, ефективності схем вакцинопрофілактики, що застосовуються та оптимізації цих схем.
2.2. Епізоотологічний моніторинг птахогосподарств Луганської області.
Епізоотичну ситуацію щодо найбільш значущих інфекційних хвороб птиці: інфекційний бронхіт курей, хвороба Марека, хвороба Ньюкасла, вивчали в п'яти птахогосподарствах Луганської області: ВАТ ПП "Перевальський", АТЗТ "Лисичанська птахофабрика", "Авіс", ВАТ "Червоний прапор", ВАТ "Сімейкінське".
Для визначення епізоотичного стану птахогосподарств проводили аналіз виконання ветеринарно-санітарних та спеціальних заходів щодо охорони господарств від заносу інфекції та захисту від захворювань різної етіології, схем вакцинопрофілактики, що застосовуються. В дослідженнях враховували умови годівлі, утримання птиці, в залежності від напрямків продуктивності, клінічний стан, патологоанатомічні зміни у загиблої та вимушено забитої птиці.
Динаміку рівня антитіл в сироватці крові птиці різних вікових груп визначали за даними сероконтролю, який проводили із використанням РНГА та РЗГА.
Для вірусологічних досліджень щодо ВІБ від загиблої птиці відбирали відповідні органи: нирки, яйцеводи, фолікули, селезінку, легені, трахею, бурсу Фабриціуса.
2.3. Схеми дослідів.
З метою визначення впливу вакцинації проти ВІБ на імунну систему та біохімічні показники крові курчат, в залежності від наявності материнських антитіл, були сформовані групи 1-денних курчат, по 25 голів в кожній. Дослідні групи курчат утримували в окремих приміщеннях. Годівлю курчат здійснювали відповідним до віку птиці комбікормом.
Схема досліду 1
п/пГрупи курчатІмунізація проти інфекційного бронхіту кур спрей-методомІмунізація проти інфекційного бронхіту кур випоюваннямСтроки проведення досліджень крові курчатВ РНГАІмунологічнихБіохімічних1Із наявністю материнських антитіл до вірусу інфекційного бронхітуУ
1-денному віці-Через 7, 14 днівЧерез 14, 35 днівЧерез 14 днів1аУ
1-денному віціУ 20 днівЧерез 15, 25 днівЧерез 15, 25 днів -2Без материнських антитіл до вірусу інфекційного бронхітуУ
1-денному віці-Через 7, 14 днівЧерез 14, 35 днівЧерез 14 днів2аУ
1-денному віці
У 20 днів3Із наявністю материнських антитіл до вірусу інфекційного бронхіту--Через 7, 14 днівЧерез 14, 35 днівЧерез 14 днів4Без антитіл до вірусу інфекційного бронхіту-У 20 днівЧерез 15, 25 днівЧерез 15, 25 днів-
Ефективність одночасної імунізації курчат у 1-добовому віці щодо ІБК, ХН, ХМ визначали в досліді, проведеному за такою схемою.
Схема досліду 2
Номер
групи Хвороба проти якої проводили вакцинаціюСтроки проведення досліджень крові курчатВік курчатРНГА, РЗГАімунологічніБіохімічні1 день20 днів1--У 20, 35, 45 днівУ 35, 45 днівУ 35, 45 днів2Хвороба Марека-У20, 35, 45 днів- // -- // -3Хвороба Марека, Інфекційний бронхіт кур +Хвороба НьюкаслаІнфекційний бронхіт кур
випоювання- // -- // -- // -4Інфекційний бронхіт кур, Хвороба НьюкаслаІнфекційний бронхіт кур
випоювання- // -- // -- // - Біологічні системи
В експериментах по ізоляції вірусу інфекційного бронхіту, титруванню штамів ВІБ було використано 1943 ембріона 9- та 11-денної інкубації, які отримували із ВАТ "Сімейкіньке" від батьківського стада птиці породи Хайсекс коричневий, вільного від інфекційних захворювань.
Відпрацювання схем вакцинації проводили на курчатах в кількості 150 голів, віком від 1 до 45 днів.
Серологічний моніторинг інфекційних захворювань птиці та виявлення поствакцинальних антитіл, за допомогою РНГА, РЗГА, проводили на поголів'ї птиці 242000 голів різних вікових груп в динаміці.
Вакцини
1. Жива вакцина проти ІБК та хвороби Ньюкасла, що містить 106 ЕІД50 шт. Ла-Сота вірусу хвороби Ньюкасла та 103 ЕІД50 шт. H-120 вірусу інфекційного бронхіту курей, серія №9108711 від 01.2001, виробництва Німеччини. Вакцинацію курчат 1-денного віку проводили спрей-методом.
2. Жива вакцина проти хвороби Марека, що містить 1000 доз PFU герпесвірусу індиків, шт. FC 126. Вакцина виготовлена в культурі фібробластів SPF ембріонів, виробник Німеччина. Серія №0002111 від 03.2001. Вакцинацію курчат проводили введенням 0,2 см3 вакцини підшкірно у середню третину шиї.
3. Жива вакцина проти інфекційного бронхіту курей, що містить 1000 доз 106 ЕІД50 вірусу ІБ, шт. Н-120, виготовлена на SPF ембріонах. Серія №980406 від 10.2000. Вакцинацію курчат проводили за настановою методом випоювання.
Штами вірусів
В дослідах по індикації та ідентифікації вірусу ІБК використовували епізоотичний штам ЛІ-1 та вакцинний штам Н-120.
Вірусологічні дослідження
Для ізоляції вірусу інфекційного бронхіту був відібраний патологічний матеріал від курей-несучок 240-денного віку в період зниження несучості на 20%, появи знебарвленого яйця, деформованого та без шкаралупи, оваріосальпінгітів, клоацитів, жовткових перитонітів.
Від загиблої та вимушено-забитої птиці відбирали селезінку, нирки, яйцеводи, фолікули, печінку. Патологічний матеріал для вірусної ізоляції готували за загальноприйнятою методикою. Після контролю на відсутність бактеріальної та грибкової контамінації, на стандартних живильних середовищах, досліджуваний матеріал вводили на ХАО курячих зародків 9- та