РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Общая характеристика и клиническое обследование больных
Для решения поставленных задач за период с 1999 по 2002год было обследовано и
пролечено 42 больных с серорезистентным сифилисом – мужчин – 14 (33,3%), женщин
– 28 (66,7%), в возрасте от 19 до 63 лет. Все пациенты обследовались и лечились
в клинике Института дерматологии и венерологии АМН Украины, где и выполнялись
все научные исследования. Всем больным проводились общие анализы крови, мочи,
кала, биохимические исследования крови (общий белок, уровень билирубина, АлАТ,
АсАТ, уровень глюкозы).
При клиническом обследовании учитывались возрастные данные, сексуальный анамнез
больных. При сборе анамнеза уточнялись данные о перенесенных ранее соматических
и передающихся половым путём заболеваниях, а также о предыдущих методах лечения
до установления диагноза серологической устойчивости.
Объективный осмотр женщин включал в себя осмотр кожи, слизистой полости рта,
вульвы, слизистой преддверия и стенок влагалища, а также шейки матки. При
осмотре уретры учитывалась отёчность и гиперемия губок, наличие парауретральных
протоков, интенсивность и характер выделений. При осмотре стенок влагалища
учитывалась гиперемия стенок, наличие эрозий, характер, количество и цвет
отделяемого. Осматривая шейку матки, обращали внимание на её форму, наличие
эрозий, количество и цвет отделяемого. Проводилось бимануальное исследование
матки и придатков.
При обследовании мужчин проводился осмотр кожи, слизистой полости рта, полового
члена, крайней плоти, уздечки, определялось состояние парауретральных протоков.
Осматривая уретру, определяли отёчность и гиперемию её губок, наличие и
характер выделений. Проводили пальпацию мошонки, предстательной железы,
семенных пузырьков. При осмотре больных (как мужчин, так и женщин) особое
внимание обращалось на состояние периферических лимфоузлов.
2.2. Серологические методы исследований
2.2.1. Микрореакция преципитации (МР) с кардиолипиновым антигеном
Принцип: при добавлении к плазме или сыворотке крови больного сифилисом
эмульсии кардиолипинового антигена образуется преципитат (комплекс
антиген-антитело), который оседает в виде хлопьев белого цвета.
Ингредиенты:
1. Антиген кардиолипиновый для микрореакции.
2. Холин-хлорид (включается в упаковку с антигеном).
3. Хлорид натрия химически чистый (или цитрат натрия).
Контроль реакции проводится с использованием нативных сывороток крови
(положительной, слабоположительной, отрицательной в РСК).
Получение инактивированной сыворотки крови. Кровь берут из вены, получают
сыворотку крови и инактивируют её так же, как для РСК (см. ниже).
Методика постановки микрореакции с плазмой и инактивированной сывороткой крови.
Пастеровской пипеткой отбирают плазму или инактивированную сыворотку крови и
вносят по три капли в лунки, куда потом добавляют одну каплю эмульсии
кардиолипинового антигена. Ингредиенты смешивают встряхиванием пластинки на
протяжении 5 мин., потом в каждую лунку добавляют по одной капле изотонического
раствора натрия хлорида, смешивают встряхиванием пластинки и оставляют при
комнатной температуре на 5 мин. (оптимальный температурный режим реакции 23 –
280С). Результаты учитывают лишь после появления хлопьев в контрольной
слабоположительной сыворотке крови, но не позднее 7 – 10 мин. после соединения
ингредиентов.
Учет результатов реакций. Результаты читают невооруженным глазом и над
искусственным источником освещения. В лунках с плазмой и сывороткой крови,
которые получили от больного сифилисом, образуются разные по размерам хлопья.
Появление больших хлопьев расценивают как положительный результат (4+, 3+),
средней величины и мелких – как слабоположительный (2+, 1+).
При отрицательном результате хлопья не образуются. В сомнительном случае
необходимо ориентироваться на контроль отрицательной сыворотки крови. Если в
нем хлопья отсутствуют, а в образцах плазмы или сыворотках крови лиц, которых
обследуют, образовались мелкие хлопья, результат в этом случае считают
сомнительным.
2.2.2. Количественный метод микрореакции
Количественный метод микрореакции дает возможность, не удлиняя времени
постановки реакции (15 – 30 мин.), объективней оценить состояние обследуемых
(уровень антител преципитинов) и использовать его как критерий оценки в
динамике лечения больных сифилисом.
Разведения сыворотки или плазмы получают таким путем: во все лунки
плексигласовой пластины разливают аппаратом Флоринского по 15 мл (три капли по
0,05 мл) сыворотки или плазмы. Смешивают содержимое лунки первого ряда и
переносят аппаратом Флоринского (можно и пипеткой из баллончика) к следующему
ряду лунок, потом смешивают содержимое второго ряда и переносят к 3-му ряду.
Таким образом, переносят смесь изотонического раствора хлорида натрия и
сыворотки (плазмы) к 4-му, 5-му, 6-му ряду лунок пластины. Из последнего ряда
лунок выливают по 0,15 мл и получают разведение сыворотки или плазмы 1:2, 1:4,
1:8, 1:16, 1:32, 1:64. Реакцию определяют по выпадению преципитата.
Титром сыворотки или плазмы считают то разведение, которое дает результат на
2+.
Обследования больных сифилисом и лиц с псевдоположительными серореакциями
параллельно РСК и МР с кардиолипиновым антигеном показало, что определенному
титру РСК соответсвует определенный титр МР при использовании в реакции плазмы
или сыворотки.
Так, во время исследования сыворотки крови, титру РСК 1:5 соответствует титр МР
1:4 (от 2 до 4), титру РСК 1:10 (от 2 до 8), титру РСК 1:20 – титр МР 1:6 (от 2
до 4-8), титру РСК 1:40- титр МР 1:8 (от 4 до 16), титру РСК 1:80 – титр МР
1:12 (от 8 до 16-32), титру РСК 1:160 – титр МР 1:18 (от 8 до
- Київ+380960830922