РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Настоящая работа основана на результатах клинического, биохимического, гистохимического и иммунологического обследования 78 больных ХКВ, 36 больных с СКВ. Контрольную группу в наших исследованиях составили 30 практически здоровых лиц, аналогичных по возрастно-половому составу больным ХКВ. Для разработки метода дифференциальной диагностики с помощью лектинов использовался биопсийный материал пораженной кожи 7 больных ХКВ, 5 больных КПЛ и 6 больных псориазом.
Клиническая часть работы выполнена на базе стационара Республиканского кожно-венерологического диспансера (г. Симферополь, главный врач - Г.П.Чинов). Исследования проводились в лабораториях кафедр Крымского государственного медицинского университета им. С.И. Георгиевского (ректор - профессор А.А.Бабанин).
Клиническая характеристика особенностей течения болезни проводилась с учетом как основного, так и сопутствующих диагнозов. Диагноз выставлялся после тщательного изучения и анализа жалоб, анамнеза жизни и заболевания, клинических проявлений дерматоза, результатов общесоматических исследований.
При сборе анамнеза нас интересовали причины и длительность заболевания, частота рецидивов. Кроме этого, выясняли применявшееся в прошлом лечение, его эффективность, время пребывания на больничном листе, продолжительность ремиссий. Особое внимание уделялось выявлению сопутствующей патологии со стороны внутренних органов и систем. Приступая к осмотру больных, определяли их общее состояние, тип телосложения, характер питания, оценивали состояние здоровой неизмененной кожи и видимых слизистых оболочек. В клинической характеристике дерматоза учитывали распространенность процесса, выраженность морфологических элементов сыпи. Для оценки состояния пациентов использовались общеклинические методы исследования: общий анализ крови и мочи, анализ крови на сахар, исследование кала на яйца гельминтов, биохимический анализ крови. По показаниям, с целью уточнения морфофункционального состояния внутренних органов, назначалось обследование и консультация у смежных специалистов: терапевта, ревматолога, гастроэнтеролога, эндокринолога, иммунолога, невропатолога, гинеколога, оториноляринголога.
Наряду с общепринятыми клиническими лабораторными методами нами осуществлены специальные биохимические, гистохимические и иммунологические исследования. У больных (78 человек) брали кровь натощак из локтевой вены и утреннюю порцию мочи дважды: накануне начала терапии и после ее завершения, у 7 больных ХКВ была проведена биопсия пораженной кожи. Практически здоровые (30 человек) сдавали кровь и мочу однократно.
Для проведения ряда гистохимических и иммунологических исследований, с целью дифференцированного анализа выявленных патологичеких изменений, нами также обследовано 36 больных СКВ в ревматологическом отделении Республиканской клинической больницы им. Н.А.Семашко (зав.отделением - С.Н.Захарова), у которых брали кровь натощак из локтевой вены. Кроме этого в Республиканском кожно-венерологическом диспансере у 5 больных с красным плоским лишаем (КПЛ) и у 6 больных с псориазом (П) была проведена биопсия пораженной кожи.
Методической особенностью работы явилось одновременное изучение иммунологических и биохимических показателей и влияние на них комплексного лечения с применением энтеросгеля, курантила, нимесулида (на фоне традиционной терапии) у больных ХКВ.
2.1. Метод лектиногистохимии
Исследования проводились на базе лаборатории биотехнологии ЦНИЛ КГМУ (зав. ЦНИЛ д.м.н., проф. Ефетов К. А.). Материалом служили образцы пораженной кожи больных ХКВ, КПЛ, П, а также образцы нормальной кожи, взятые от здоровых доноров с (0) I группой крови при пластических операциях.
Кусочки кожи быстро фиксировали 10% нейтральным формалином сразу же после биопсии. Ткани заливали в парафин и из них изготовляли серийные срезы толщиной 6-7 мкм. Обзорные препараты окрашивали гематоксилином и эозином. Использование только парафиновой заливки дало возможность сочетать общегистологические и лектиногистохимические методы исследования в серийных срезах одного и того же кусочка кожи.
Серийные срезы после депарафинизации погружали в 96 градусный этанол, а затем для инактивации эндогенной пероксидазы инкубировали 20 минут в метаноле, содержащем 0,3% перекиси водорода. Препараты обрабатывали с применением стандартных наборов НПК "Лектинотест" г. Львов в разведении лектинов 1:50 по рекомендуемой методике Луцик А.Д. [80]. Визуализацию мест связывания лектина проводили в системе диаминобензидин - перекись водорода. Контроль специфичности реакции осуществляли путем исключения из схемы обработки препаратов диаминобензидина.
Для обработки гистологических препаратов использовали: лектин бузины черной (SNA), специфичный к концевым нередуцирующим остаткам N-ацетилнейраминовой (сиаловой) кислоты гликополимеров; лектин арахиса (PNA), специфичный к ?-D-галактозе; лектин чечевицы пищевой (LCA), специфичный к ?-D-маннозе; лектин сои (SBA), специфичный к N-ацетил-D-галактозамину; лектин зародышей пшеницы (WGA), специфичный к N-ацетилнейраминовой кислоте и в меньшей степени - к N-ацетил-D-глюкозамину и лектин бобовника анагиролистного (LABA), специфичный к ?-L-фукозе. Сокращенное наименование лектинов приведено в соответствии с международной номенклатурой лектинов [194]. Специфичность лектинов к терминальным нередуцирующим моносахаридным остаткам гликоконъюгатов дана в соответствии с данными [59, 127, 143, 180, 172]. Буквами ? и ? обозначены соответственно ? и ?-аномеры углеводов.
Интенсивность окрашивания срезов различными лектинами оценивалась в баллах методом полуколичественной оценки. Интенсивность развившейся реакции оценивали в баллах: 0 - отсутствие реакции, 1 балл - очень слабая реакция, 2 балла - слабая реакция, 3 балла - умеренная реакция, 4 балла - сильная реакция.
Независимые вариационные ряды интенсивности окрашивания клеток и неклеточных тканевых структур кожи различными лектинами, оц
- Київ+380960830922