РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Под наблюдением находилось 125 детей с хроническими заболеваниями
гастродуоденальной зоны в возрасте от 8 лет 1 месяца до 14 лет 12 месяцев и 15
практически здоровых детей того же возраста. Все дети находились на
амбулаторном и стационарном лечении в гастроэнтерологическом отделении ДДКБ г.
Харькова. Верификация диагноза проводилась в соответствии с Сиднейской
классификацией 1990г и МКБ-10.
На первом этапе проводилось клинико-лабораторное обследование больных. Диагноз
ХГД устанавливался по следующим критериям: клиническому наличию, характеру и
локализации абдоминально-болевого, диспептического синдромов; эндоскопическим –
воспаления слизистой оболочки желудка и (или) наличия эрозий; данных характера
желудочной секреции.
При изучении анамнеза особое внимание обращали на длительность заболевания,
характер течения болезни – количества периодов обострения, применяемую терапию.
Также изучали семейный анамнез. Клиническое обследование включало опрос и
осмотр больного. При опросе уделялось внимание характеру и продолжительности
жалоб больного, причине их возникновения, интенсивности основных клинических
симптомов - болевого, диспептического и астено-невротического.
На втором этапе работы с помощью указанного ниже специального метода проведено
исследование микроэлементного баланса в двух биологических средах (в ПСГ и
цельной крови) ядерно-физическим методом элементного анализа по
характеристическому рентгеновскому излучению, возбуждаемому протонами на
перезарядном ускорителе ПГ-5 в ННЦ ХФТИ, а также проведено а) исследование
состояния СРО липидов по показателям БХЛ сыворотки крови и пристеночной слизи,
б) определение фермента антиоксидантной защиты (СОД) в желудочном соке и крови,
в) исследование концентрации фукозы в желудочном соке и моче проводили
цистеиновым методом по Dische и Shetle.
2.1. Ядерно-физический метод элементного анализа по характеристическому
рентгеновскому излучению, возбуждаемому протонами
Определение концентрации МЭ в цельной крови (Cu, Zn, Fe, Mg, Mn, Si, Se, Pb,
Ca, Rb, Sr, Br, Ni, Mo, Al) и в пристеночном слизистом геле (Cu, Zn, Fe, Mg,
Mn, Si, Se, Pb, Ca, Rb,Ti, Sr, As, Co,Bi, Br, Ni, Mo, Al) проводили в
Национальном научном центре Харьковского физико-технического института (отдел
прикладной и фун-даментальной ядерной физики, нач. отдела, канд. физ. - мат.
наук Дикий Н. П.). Был разработан ядерно-физический метод элементного анализа
по характеристическому рентгеновскому излучению, возбуждаемому протонами на
перезарядном ускорителе ПГ-5 [71].
Метод элементного анализа по ХРИ, возбуждаемому ускоренными протонами (1-3 МэВ)
обладает такими положительными характеристиками как многоэлементность (от
натрия до урана), высокая чувствительность микроколичества исследуемого объекта
~50мг. При этом абсолютный предел детекторирования может достигать 10-12г, а
относительный – 0,1 мкг/г. Эти величины достигаются для мишеней на углеродных
или майларовых подложках.
Ускорительное время, приходящее на анализ одной мишени, составляет 5ч10 мин.
Такое время необходимо для проведения автоматической обработки спектра.
Исследуемые образцы представляют собой тонкие слои ( 1-5 мкг/см2) субстрата на
тонких углеродных подложках.
В качестве объектов исследования были взяты: цельная кровь и пристеночный
слизистый гель.
Мишени из вышеперечисленных объектов сначала высушивались в сушильном шкафу при
температуре не выше 70є С. Затем образцы растирались в агатовой ступке с
последующим растворением их в деионизованной воде. Навеска исследуемого образца
составляла не более 0,5-1 мг, количество деионизованной воды – 0,2 мл.
Полученная суспензия опять тщательно перемешивалась в агатовой ступке, а затем
порциями по 10-20 мкг наносилась на подложку из спектроскопически чистого
графита. Образец высушивался сначала при температуре 60єС, после чего на сухой
слой наносилась новая порция образца. Общая толщина слоя составляла 1-2мм.
Приготовленную таким образом мишень помещали в сушильный шкаф при температуре
80 - 120єС на 10- 20 минут.
Для проведения калибровочных измерений в анализируемые объекты в процессе
первичной подготовки мишени добавляли заданное количество солей и оксидов
металлов в следующих концентрациях: CuSO4 – 0,04 мг/г; ZnSO4 – 0,22 мг/г;
Pb(NO3)2 – 0,78 мг/г; CdSO4 - 50% обогащения образца .
В качестве связующего вещества использовался 0,5 % водный раствор
поливинилацетатного клея, добавленный в смесь при температуре 200єС в течение
15 минут. В результате анализа экспериментальных данных подтверждена
практическая идентичность образцов в каждой серии эталонов.
2.2. Исследование биохемилюминесценции сыворотки крови и желудочного сока,
индуцированных раствором перекиси водорода
Для исследования БХЛ сыворотки крови и желудочного сока, использовали метод
БХЛ, индуцированный раствором перекиси водорода [179]. Анализ кинетики БХЛ
позволяет получить информацию в виде трех основных параметров: 1) значение
(имп/сек) максимума первой вспышки (I max), которое дает возможность судить о
количестве продуктов ПОЛ в субстрате (0,2 мл сыворотки), которые прореагировали
с данным количеством индуцента; 2) значение светосуммы за 4 мин соответствует
общему количеству продуктов ПОЛ (?4), которые прореагировали с данным
количеством индуцента ( 10% раствор перекиси водорода); 3) конечное значение (I
кон) на кинетической кривой БХЛ сыворотки соответствует количеству не
прореагировавших продуктов ПОЛ и косвенно позволяет судить об антиоксидантном
резерве в субстрате.
Исследование БХЛ проводилось в ННЦХФТИ на квантометрической установке
- Київ+380960830922